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柱式組織基因組提取試劑盒
產(chǎn)品貨號:28105
產(chǎn)品規(guī)格:100 次/200 次
產(chǎn)品簡介:
本試劑盒適合于從新鮮或冷凍的動物、人組織中提取高純度總 DNA。本品可純化獲得分子量大為 50 kb 的 DNA的 片段,純化過程不需使用苯酚等有毒溶劑,無需乙醇沉淀。本試劑盒采用優(yōu)化的緩沖體系使 裂解液中的 DNA 高效特異的結合到硅基質(zhì)離心吸附柱上,PCR 和其他酶促反應的抑制劑可通過兩步洗滌步驟 被有效去除,后使用低鹽緩沖液或水洗脫,即可得到高純度 DNA。純化得到的 DNA 可以直接用于酶切、PCR、 Real-Time PCR、文庫構建、Southern Blot、分子標記等下游實驗。
自備試劑:無水乙醇
包裝清單:
操作步驟:
1.如果提取材料為動物組織,取 25 mg(脾組織用量應少于 10 mg);如果材料為鼠尾,取一段長度為 0.4-0.6 cm 的大鼠鼠尾或兩段長度為 0.4-0.6 cm 的小鼠鼠尾。
a.樣本進行液氮研磨或切成小塊后置于 1.5 ml 離心管中,加入 180 μl Buffer GTL,將不同樣品做好標記。
b.若使用勻漿器處理樣本,勻漿前向樣本中加入不超過 80 μl Buffer GTL,勻漿后加入 100 μl Buffer GTL。
注意:
1)確保各組織的量不要超出*范圍。
2)組織樣本在加入 Buffer GTL 之前用液氮研磨或加入 Buffer GTL 用勻漿器勻漿處理,可以增加 裂解效率。
2.加入 20 μl Proteinase K,渦旋震蕩使樣品*混勻。56℃水浴,直至組織*裂解,孵育過程中可每 隔一段時間顛倒或震蕩離心管使樣品分散。
注意:
1)不同組織消化時間不同,通常 1-3 小時即可完成,鼠尾需要消化 6-8 小時,必要時過夜消化,不會影響 后續(xù)操作。
2)如果孵育和渦旋震蕩后仍然有膠狀物質(zhì),延長 56℃孵育時間或再加入 20 μl Proteinase K 消化。
3)如需去除 RNA,可在上述步驟完成后,加入 4μl 的濃度為 100 mg/ml 的 RNase A 溶液,渦旋 15 秒,室 溫放置 5-10 分鐘。 3.加入 200 μl Buffer GL,渦旋震蕩充分混勻,70℃水浴 10 分鐘。短暫離心后加入 200 μl 無水乙醇, 渦旋震蕩充分混勻。
注意:
1)加入 Buffer GL 和無水乙醇后要立即渦旋震蕩混勻。
2)加入 Buffer GL 和無水乙醇后可能會產(chǎn)生白色沉淀,不會影響后續(xù)實驗。一些組織(如脾,肺)在加入 Buffer GL 和無水乙醇后可能形成溶膠狀產(chǎn)物,此時*進行劇烈震蕩或渦旋處理。
4.柱平衡:向已裝入收集管(Collection Tubes)中的吸附柱(Spin Columns)中加入 200μl Buffer PS, 12000 rpm 離心 1 分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
5.將步驟 3 所得溶液短暫離心,全部加入到已裝入收集管的吸附柱(Spin Columns)中,若一次不能加完 溶液,可分多次轉入。12000 rpm 離心 1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
6.向吸附柱中加入 450 μl Buffer PW(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12000 rpm 離心 1 分鐘, 倒掉收集管中的廢液,將吸附柱放回收集管中。
注意:如果純化的 DNA 用于鹽敏感的實驗(例如平末端連接或直接測序),建議加入 Buffer PW 靜置 2-5 分 鐘再離心。
7.重復步驟 6。
8.12000 rpm 離心 1 分鐘,倒掉收集管中的廢液。
注意:
這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除,乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶促反應(酶切、PCR 等)。
9.將吸附柱放到一個新的 1.5 ml 離心管(自備)中,向吸附膜中間位置懸空滴加 50μl Buffer EB,室溫 放置 2 分鐘。12000 rpm 離心 1 分鐘,收集 DNA 溶液。-20℃保存 DNA。
注意:
1)洗脫液的 pH 值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液,應保證其 pH 值在 7.0-8.5 之間(可以用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)到此范圍)。
2)為了提高基因組提取量,可將離心得到的溶液重新加到吸附柱中,室溫放置 2 分鐘,12000 rpm 離心 1 分鐘。
3)洗脫體積不應小于 30μl,體積過少會影響回收效率。
注意事項 :
1.*使用前應按照試劑瓶標簽的說明在 Buffer PW 中加入無水乙醇(Buffer PW 100 次包裝 18ml,使 用前加入 72ml 無水乙醇;Buffer PW 200 次包裝 18ml,使用前加入 144ml 無水乙醇);
2.所有離心步驟均可室溫下進行。
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