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淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基(染色體?。?/div>
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貨物所在地:上海上海市

更新時間:2024-12-19 11:42:00

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本產(chǎn)品為細(xì)胞標(biāo)本前處理試劑,用于淋巴細(xì)胞增殖培養(yǎng),培養(yǎng)后的淋巴細(xì)胞用于體外診斷,該產(chǎn)品不用于治療性用途。

淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基(染色體病)

產(chǎn)品名稱:

通用名稱:淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基

英文名稱:Lymphocyte Medium

包裝規(guī)格:4ml/瓶,56 瓶/盒

預(yù)期用途:

  本產(chǎn)品為細(xì)胞標(biāo)本前處理試劑,用于淋巴細(xì)胞增殖培養(yǎng),培養(yǎng)后的淋巴細(xì)胞用于體外診斷,該產(chǎn)品不用于 治療性用途。 主要組成成分: RPMI1640、小牛血清、肝素、PHA 等。

使用方法:

1. 采血與接種

  采取外周血 1-2ml,在無菌條件下立即種血 0.3ml(7 號針頭約 20 滴)至淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi),充分搖勻。

2. 培養(yǎng)

  將培養(yǎng)瓶放入 37℃恒溫箱中培養(yǎng) 68-72 小時,培養(yǎng)期間注意觀察培養(yǎng)基有無凝血、溶血或長菌的現(xiàn)象 (可培養(yǎng) 24 小時后將培養(yǎng)基輕搖一次,以便細(xì)胞可以獲得充分的營養(yǎng))。

3. 制片

3.1 秋水仙素處理:

  在終止培養(yǎng)前,加入濃度為 20μg/ml 的秋水仙素 1-3 滴(7#針頭豎滴)后,繼續(xù)培養(yǎng) 2-3 小時;

3.2 收細(xì)胞:

  將培養(yǎng)完成的培養(yǎng)基倒入對應(yīng)的離心管內(nèi),以 1500rpm 離心 7-10 分鐘,棄去上清液;

3.3 低滲:

  向離心管內(nèi)加入 37℃預(yù)溫的低滲液(0.075mol/L 氯化/鉀溶液)8ml,用吸管反復(fù)吹勻 10 次,置 37℃水浴箱 中水浴 25-35 分鐘;

3.4 預(yù)固定:

  向低滲的細(xì)胞懸液內(nèi)緩慢加入新配制的固定液(甲醇和乙酸按 3:1 的比例混合)1-1.5ml,輕輕混勻后置室溫 靜置 20 分鐘后,1500rpm 離心 7-10 分鐘,棄去上清液;

3.5 固定:

  沿管壁緩慢加入現(xiàn)配的預(yù)溫至 37℃的新配固定液約 8ml 輕輕混勻,然后 2000rpm 離心 10 分鐘。加入固定液 再次固定,棄上清,重復(fù)固定 1-2 次。用固定液將沉淀調(diào)成細(xì)胞懸液(不宜太濃,一般加固定液至 0.5ml)在冰 片上滴片,每張片上滴 2 滴。

3.6 烤片:

  立即放入 75℃烤箱中烤片 3 小時。

4. 顯帶

  先將玻片放在預(yù)溫至 37℃的 0.25%胰酶溶液中(pH=7.2-7.4)消化 1 分左右,每次作用時間并不*相同。 可先試一張片子,再根據(jù)顯帶效果調(diào)整胰酶作用時間,再放在預(yù)溫至 37℃的 0.85% NACl 溶液中漂洗兩次,在預(yù) 溫至 37℃的吉姆薩染液中染色 10 分鐘,自來水沖洗干凈,用吹風(fēng)機吹干,即可閱片。

注意事項:

1. 采集的外周血若立即接種則無需加肝素抗凝,如需保存標(biāo)本,應(yīng)加肝素抗凝;

2. 采集的外周血在冰箱 4℃保存,保存期不亦超過一周。

儲存條件及有效期:

  4-8℃保存,有效期 1 個月,-5℃以下保存,有效期 12 個月,可穩(wěn)定至保質(zhì)期末。

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