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淋巴細胞培養基(放射工作人員體檢)
產品名稱:
通用名稱:淋巴細胞培養基
英文名稱:Lymphocyte Medium
包裝規格:4ml/瓶,56 瓶/盒
預期用途:
本產品為細胞標本前處理試劑,用于淋巴細胞增殖培養,培養后的淋巴細胞用于體外診斷,該產品不用于 治療性用途。
主要組成成分:
RPMI1640、小牛血清、肝素、PHA 等。
使用方法:
1. 采血與接種
采取外周血 1-2ml,在無菌條件下立即種血 0.3ml(7 號針頭約 20 滴)至淋巴細胞培養基內,充分搖勻。
2. 培養
將培養瓶放入 37℃恒溫箱中培養 48-52 小時,培養期間注意觀察培養基有無凝血、溶血或長菌的現象 (可培養 24 小時后將培養基輕搖一次,以便細胞可以獲得充分的營養)。
3. 制片
3.1 秋水仙素處理:
在終止培養前 24h,加入濃度為 10μg/ml 的秋水仙素 1-3 滴(7#針頭豎滴)后,繼續培養 24 小時;
3.2 收細胞:
將培養完成的培養基倒入對應的離心管內,以 1500rpm 離心 7-10 分鐘,棄去上清液;
3.3 低滲:
向離心管內加入 37℃預溫的低滲液(0.075mol/L 氯化/鉀溶液)8ml,用吸管反復吹勻 10 次,置 37℃水浴箱中水 浴 25-35 分鐘;
3.4 預固定:
向低滲的細胞懸液內緩慢加入新配制的固定液(甲醇和乙酸按 3:1 的比例混合)1-1.5ml,輕輕混勻后 1500rpm 離 心 7-10 分鐘,棄去上清液;
3.5 固定:
沿管壁緩慢加入現配的新配固定液約 8ml 輕輕混勻,置室溫放置 20 分鐘,然后 1500rpm 離心 8 分鐘,棄上清。 加入固定液再重復固定一次。用固定液將沉淀調成細胞懸液(不宜太濃,一般加固定液至 0.3ml)在冰片或 37℃ 預溫的玻片上滴片,每張片上滴 2 滴。
4. 染色
滴片自然干燥后用 10%的吉姆薩染液中染色 10 分鐘,自來水沖洗干凈,用吹風機吹干或自然干燥后,即可閱片。
注意事項:
1. 采集的外周血若立即接種則無需加肝素抗凝,如需保存標本,應加肝素抗凝;
2. 采集的外周血在冰箱 4℃保存,保存期不亦超過 72h。
儲存條件及有效期:
4-8℃保存,有效期 1 個月,-5℃以下保存,有效期 12 個月,可穩定至保質期末。
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