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胞漿蛋白提取試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):26161
產(chǎn)品規(guī)格:50T/100T
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
本試劑盒用于哺乳動(dòng)物組織和細(xì)胞中提取胞質(zhì)蛋白,試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑, 作用較為溫和,可獲得蛋白,可用于免疫印跡實(shí)驗(yàn)等基礎(chǔ)研究實(shí)驗(yàn),由于含有上述的酶抑制劑,不能用于研究蛋 白激酶和磷酸激酶的研究。本品僅用于科研。
產(chǎn)品組成:
產(chǎn)品名稱 | 50T | 100T | 保存條件 |
---|---|---|---|
裂解液 | 50ml | 100ml | 2-8℃ |
磷酸酶抑制劑(100×) | 0.5ml | 1ml | -20℃ |
蛋白酶抑制劑(100×) | 0.5ml | 1ml | -20℃ |
PMSF(100×) | 0.5ml | 1ml | -20℃ |
操作步驟:
1. 組織胞漿蛋白的提取
1) 在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF;混勻,放置在冰上備用;
2) 稱取0.1g的新鮮組織,放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處,用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎,然后加入0.5-1ml 的新配置的裂解液,研磨直至沒(méi)有明顯的組織塊,這個(gè)過(guò)程注意冰上操作;
3) 將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中,4 ℃ 12000g 離心30min;
4) 吸取上清至新的管中;
5) 進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。 (提取好的蛋白建議保存于-80℃,即用即取,避免反復(fù)凍融,避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。)
2. 細(xì)胞胞漿蛋白的提取
1) 裂解液的用量:10 7個(gè)細(xì)胞需要裂解液1ml;
2) 貼壁細(xì)胞:棄去培養(yǎng)基,用冷的PBS洗兩次,棄去PBS,然后加入計(jì)算好的細(xì)胞裂解液;在冰上用細(xì)胞刮刀 進(jìn)行刮離細(xì)胞,將刮離的細(xì)胞裂解液移入EP管中,顛倒裂解20-30min。
3) 懸浮細(xì)胞:4℃ 400g 離心收集細(xì)胞,用冷的PBS洗兩次細(xì)胞,同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液,渦旋10s,放置冰 上裂解10min,重復(fù)3-4次;
4) 裂解完畢之后,將細(xì)胞裂解液4 ℃12000g 離心30min;
5) 將上清移入新的EP管中;進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。 (提取好的蛋白建議保存于-80℃,即用即取,避免反復(fù)凍融,避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。)
注意事項(xiàng):
1. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程,所有試劑都要需要預(yù)冷或者即融,保證操作過(guò)程中的低溫環(huán)境。
2. PSMF(有毒)現(xiàn)用現(xiàn)加,因?yàn)镻MSF在水溶液中會(huì)快速降解。
有效期:至少一年。
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