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細(xì)胞、組織核蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：26131

產(chǎn)品內(nèi)容：

操作步驟：

細(xì)胞核蛋白提取

1. 請(qǐng)?jiān)诘鞍壮樘崆叭〕?Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer、Extraction Buffer 進(jìn)行預(yù)冷。

2. 收集細(xì)胞于 1.5ml 離心管中，3000rpm 離心去上清。估算所收集細(xì)胞體積（Packed Cell Volume，PCV）。 以下步驟以 100μL 細(xì)胞體積為例，具體實(shí)驗(yàn)可根據(jù)細(xì)胞數(shù)按相應(yīng)倍數(shù)放大。

3. 每 100μL PCV 加 500μL Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer(含 DTT 及蛋白酶抑制劑)，用 10μL 槍 頭輕輕吹勻 20-30 次，避免泡沫。

4. 冰上孵育 15min (每 5min 用 10μL 槍頭輕輕吹勻 20 次)，4℃2000 rpm 離心 5min。

5. 用移液器吸棄上清，于沉淀中加入 200μL Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer (含 DTT 及蛋白酶抑制 劑)。

a．將沉淀轉(zhuǎn)移至玻璃勻漿器中，冰上勻漿 5-10 次；或 b.用 1ml 注射器（5 號(hào)針頭）反復(fù)吹吸沉淀溶 液 5 次。

  可選步驟：此時(shí)可去少量樣品用臺(tái)盼藍(lán)染色液染色，未裂解的活細(xì)胞不會(huì)被染色，裂解后的可被染色。

6. 4℃12000-14000rpm 離心 20min。

7. 將上清轉(zhuǎn)移至新 1.5ml 離心管中，此上清為細(xì)胞質(zhì)蛋白，沉淀為細(xì)胞核。

8. 于沉淀中加入 70μL Extraction Buffer (含 DTT 及蛋白酶抑制劑)，冰上孵育 30min，每隔 5min 輕 輕上下混勻 10 次。

9. 4℃ 12000-16000rpm 離心 10min。 10. 收集上清-20℃保存，此提取液即為細(xì)胞核蛋白。

組織核蛋白提取

1. 稱取 50mg 組織，將組織塊用 PBS 潤(rùn)洗，吸棄 PBS 并轉(zhuǎn)移至勻漿器中。

2. 每 50mg 組織加 500μL Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer (含 DTT 及蛋白酶抑制劑)。

3. 冰上勻漿 15-20 次至細(xì)胞破碎。

4. 收集勻漿液，4℃ 12000-14000rpm 離心 20min。

5. 將上清轉(zhuǎn)移至新 1.5ml 離心管中，此上清為細(xì)胞質(zhì)蛋白，沉淀為細(xì)胞核。

6. 于沉淀中加入 70μL Extraction Buffer (含 DTT 及蛋白酶抑制劑)，冰上孵育 30min，每隔 5min 輕 輕上下混勻 10 次。

7. 4℃ 12000-16000rpm 離心 10min。

8. 收集上清-20℃保存，此提取液即為細(xì)胞核蛋白。