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?RIPA 裂解液

產(chǎn)品貨號(hào)：T16003

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

保存條件：運(yùn)輸 4℃，*保存-20℃

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得到的蛋白 樣品可以 用于常規(guī)的 Western、IP 等。RIPA 的本意是 Radio Immunoprecipitation Assay。本產(chǎn)品 RIPA 裂解液的主要成分為 50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS 等。

操作步驟：

1. 對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：

1) 對(duì)于貼壁細(xì)胞，去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有 干擾， 可以不洗)。按照每 10 7細(xì)胞加入 200 微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞 充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞 1-2 秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照每 10 7細(xì)胞加入 200 微升裂解液 的比例 加入裂解液。用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，可 適量添加裂解液。

3) 充分裂解后，10000-14000rpm 離心 5-10 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western、免疫沉淀和 免疫共沉淀等操作。

2. 對(duì)于組織樣品：

1) 把組織剪切成細(xì)小的碎片。

2) 按照每 20 毫克組織加入 100-200 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添 加更多 的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)

3) 用玻璃勻漿器冰上勻漿，直至充分裂解。

4) 充分裂解后，10000-14000rpm 離心 5-10 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western、免疫沉淀和 免疫共沉淀等操作。

5) 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈 vortex 使樣品裂解充分。 然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng) ：

1. 裂解得到的蛋白樣品，由于含有較高濃度的去垢劑干擾，不能用 Bradford 法測(cè)定蛋白濃度，可以選用本公司 生產(chǎn)的 BCA 蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度。

2. 用戶使用前可根據(jù)需要加入蛋白酶抑制劑如 PMSF 或者根據(jù)需要再加入 leupeptin，aprotinin 等其它抑制劑。

3. 裂解液中 SDS 4℃保存易沉淀析出，使用前應(yīng)該 37℃-60℃水浴重新溶解*后回復(fù)到室溫使用。

4. 裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或 4℃進(jìn)行。