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紅細胞裂解液
  • 紅細胞裂解液
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貨物所在地:上海上海市

更新時間:2024-12-19 11:41:51

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本產品是利用細胞內外存在鹽離子濃度差而導致細胞膜脹破的原理來裂解無核紅細胞的。

本產品經無菌處理,主要用于經酶消化分散的組織細胞的分離純化,淋巴細胞的分離純化以及組織細胞蛋白與核酸提取等實驗中紅細胞的去除。

紅細胞裂解液(10×)

產品貨號:T16121

產品規格:100ml/500ml

產品簡介:

  在生物科研領域,經常需要去除紅細胞。去除紅細胞的方法有多種,如ACK LysisBuffer、Tris-氯化銨紅細胞 裂解液、Gey's Lysis Buffer。紅細胞裂解液(Red Blood Cell LysisBuffer)是一種從人、鼠或其他哺乳動物等體內的 組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細胞的溶液,其主要有效成分為 NH4Cl。

  尚寶生物 RBC Lysis Buffer(10×)配方經過優化不同于ACK Lysis Buffer,在裂解無核紅細胞的同時幾乎不損 傷淋巴細胞(Lymphocyte)或其它有細胞核的細胞。對于裂解、去除有細胞核紅細胞,例如鳥或禽類的紅細胞,效 果不佳,裂解類似細胞時,不建議采用。該裂解液經過濾除菌,為10×的濃縮液,使用1×RBC Lysis Buffer 處理 過的血液或組織細胞樣品可以用于后續的細胞培養、細胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規的分析和檢測, 尤其適用于流式細胞檢測或需要高濃度裂解液的情況。

產品組成:

名稱 規格 保存條件 RBC Lysis Buffer(10×) 100ml/500ml 4℃

自備材料:

1. 胰蛋白酶

2. 離心機

3. PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液

操作步驟(僅供參考):

注意:絕大多數情況下,應使用無菌去離子水稀釋 RBC Lysis Buffer(10×)至 1×使用,流式細胞術除外。

(一)組織細胞樣本的常規操作

1. 制備細胞懸液: 新鮮組織經過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理,通過適當方法制備成細胞懸液,離心棄上清。

2. 裂解:加入 3~5 倍細胞沉淀體積的 1×RBC Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,裂解 1~2min。本操作步驟在 4℃ 條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。

3. 離心: 4℃,400~500g 離心 5min,棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。

4. 如果發現紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟 2 和步驟 3 各一次。

5. 洗滌:根據實驗要求加入適量 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液,輕柔混勻重懸沉淀。4℃,400~500g 離心 2~3min,棄上清,該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液 的量一般應大于細胞沉淀體積的 5 倍以上。

6. 如有必要,重復上述步驟 5 一次,共洗滌 1~2 次。

7. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀,進行計數、培養等后續實驗。

(二)組織細胞樣本的快速操作(無需洗滌)

1. 制備細胞懸液:新鮮組織經胰蛋白酶或膠原酶等消化處理,制備細胞懸液,離心棄上清。

2. 裂解:加入細胞 5 倍細胞沉淀體積的 1×RBC Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,裂解 1~2min。 本操作步驟在 4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。

3. 加入 15~20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液,輕柔混勻。

4. 離心:4℃,400~500g 離心 5min,棄紅色上清,本離心步驟亦可在室溫下操作。

5. 如果發現紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟 2~4 各一次。

6. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀,進行計數、培養等后續實驗。

(三)血液樣本的常規操作

1. 取新鮮抗凝血,400~500g 離心 5min,棄上清。

2. 裂解: 加入 6~10 倍細胞沉淀體積的 1×RBC Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,裂解 1~5min。本操作步驟在 4℃ 條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。(特別提醒:對于鼠的血液,裂解 1~2min 已經足夠,對于人的外周 血,宜延長裂解時間至 4~5min,并且裂解過程中輕輕搖動以促進紅細胞裂解。)

3. 離心: 4℃,400~500g 離心 5min,棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。

4. 如果發現紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟 2 和步驟 3 一次。

5. 洗滌: 根據實驗要求加入適量 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液,輕柔混勻重懸沉淀。4℃,400~500g 離心 2~3min,棄上清,該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液 的量一般應大于細胞沉淀體積的 5 倍以上。

6. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀,進行計數、培養等后續實驗。

注意:對于微量或少量的血液樣本,可以不用第 1 步操作,可直接加入 10 倍血液體積的 ACK Lysis Buffer 進 行第 2 步操作,并在 4℃或室溫裂解 4~15min。對于鼠的血液,裂解 4~5min 已經足夠; 對于人的外周血,宜 延長裂解時間至 10min,但通常不宜超過 15min,并且裂解過程中宜適當搖動以促進紅細胞裂解。

(四)血液樣本的快速操作(無需洗滌)

1. 新鮮抗凝血中加入 10 倍體積的 1×RBC Lysis Buffer,輕輕吹打混勻,裂解 4~15min。 本操作步驟在 4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。(特別提醒:對于鼠的血液,裂解 4~5min 已經足 夠,對于人的外周血,宜延長裂解時間至 10min,但通常不宜超過 15min,并且裂解過程中宜適當搖動以促進紅 細胞裂解。)

2. 加入 20~30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液,輕柔混勻。

3. 400~500g 離心 5min,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4. 如果發現紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟 2 和步驟 3 一次。

5. 根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀,進行計數、培養等后續實驗。

注意事項:

1. 制備細胞懸液時應根據實驗需要,不一定要制備成單細胞懸液。

2. 后續試驗如果是用于細胞培養,操作過程中應注意無菌操作,盡量在超凈工作臺內操作。

3. 離心步驟盡量在 4℃離心機上操作。

4. 常規步驟不快速步驟的區別在于:常規步驟多了一步洗滌過程的離心,可以節省洗滌液的用量,并且洗滌效 果也更好,不需要大體積的離心管;快速步驟少了一次離心過程,洗滌效果略差一些,同時需要大體積的離 心管。

5. 離心洗滌后,通常極微量的紅細胞不會影響后續的檢測。

6. 如果經過 1×RBC Lysis Buffer 處理后的樣品后續用于總 RNA 的提取,在處理細胞時不必使用 DEPC 處理的 溶液,即無需在該操作中特意去除 RNase。

7. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期:12 個月有效。

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