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DNA 含量檢測試劑盒（細胞周期）

產(chǎn)品貨號：26350

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品簡介：

  細胞周期是指連續(xù)分裂細胞從一次有絲分裂結(jié)束到下一次有絲分裂結(jié)束所經(jīng)歷的整個過程。在這個過程中， 細胞遺傳物質(zhì)復(fù)制并加倍，且在分裂結(jié)束時平均分配到兩個子細胞中去。細胞周期又可以分為間期和有絲分裂期， 細胞間期常劃分為休眠期（G0），DNA合成前期（G1），DNA合成期（S），DNA合成后期（G2），整個周期 可表示為G1→S→G2→M。DNA周期檢測可用來反應(yīng)細胞周期的各個期的狀況，即細胞增殖狀況。利用細胞內(nèi) DNA能夠和熒光染料（如碘化丙啶PI）結(jié)合的特性，細胞各個時期其DNA含量不同從而結(jié)合的熒光染料不同，流 式細胞儀檢測的熒光強度也不一樣。

  細胞發(fā)生凋亡時，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮，核裂解，產(chǎn)生凋亡小體，使細胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細胞 凋亡的早期，細胞對前向角光散射的能力顯著降低，對90°角光散射的能力增加或沒有變化。在細胞凋亡的晚期， 前向角和90°角光散射的信號均降低。因此可以通過流式細胞儀測定細胞光散射的變化來觀察凋亡細胞。用PI對 細胞進行染色，凋亡細胞由于總DNA量降低，于正常G0/G1細胞群前出現(xiàn)DNA低染細胞群，即G1峰前出現(xiàn)亞二 倍體峰（sub-G1）,即細胞凋亡群。

本試劑盒可應(yīng)用于培養(yǎng)細胞（懸浮、貼壁）的DNA含量（細胞周期）檢測。

產(chǎn)品內(nèi)容:

操作步驟（僅供參考）：

1. 用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細胞凋亡，同時設(shè)立陰性對照組，并收集細胞。

2. 用PBS洗滌細胞一次，1500rpm，5min離心收集，調(diào)整細胞濃度為 1×10 6 /ml,取1ml單細胞懸液。

3. 制備的單細胞懸液離心后，去除上清，在細胞中加入70%預(yù)冷乙醇500ul固定2小時至過夜，4℃保存，染色前 用PBS洗去固定液；如需要，細胞懸液可用200目細胞篩網(wǎng)過濾一次。

4. 細胞沉淀中加100µl RNase A溶液，重懸細胞，37℃水浴30min。

5. 再加入400µl PI染色液混勻，4℃避光孵育30min。

6. 上機檢測，記錄激發(fā)波長488nm處紅色熒光。

注意事項：

1. 碘化丙啶（PI）染色液保存和使用過程中應(yīng)注意避光。

2. PI有毒，操作時應(yīng)戴手套，并避免污染。

3. 熒光染料都存在淬滅問題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測。