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碘化丙啶 PI 染色液（50µg/ml）

產品貨號：G6230

產品規格：10ml/50ml

產品簡介：

  碘化丙啶染色(PI stain)可以對細胞周期與細胞凋亡進行分析。碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI)是一種可以嵌 合到雙鏈DNA和RNA的堿基對中并與之結合的熒光染料，無堿基特異性。碘化丙啶與雙鏈DNA結合后可以產生 熒光，并且熒光強度和雙鏈DNA的含量成正比。細胞內的DNA被Propidium Iodide染色后，可以用流式細胞儀對 細胞進行DNA含量測定，然后根據DNA含量的分布情況，可以進行細胞周期和細胞凋亡的分析。碘化丙啶染色 后，假設G0/G1期細胞的熒光強度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2，正在 進行DNA復制的S期細胞的熒光強度為1～2之間。凋亡細胞由于細胞核發生濃縮以及發生DNA的片段化(DNA fragmentation)導致部分基因組

   DNA的片斷在染色過程中丟失，因此凋亡細胞碘化丙啶染色后呈現明顯的弱染，即熒光強度小于1，在流式檢 測的熒光圖上出現所謂的sub-G1峰，即凋亡細胞峰。細胞凋亡時，流式細胞檢測可呈現亞二倍體核型的特征，根 據光散射的特點，PI染色可以區分細胞凋亡和細胞壞死的細胞峰型。細胞凋亡時，出現凋亡細胞皺縮、染色質濃 縮、核碎裂，產生凋亡小體，使細胞的前向光散射低于正常。在細胞凋亡的早期，細胞對前向角光散射的能力顯 著降低，對側向光散射的能力增加或沒有變化。在細胞凋亡的晚期，前向和側向光散射的信號均降低。細胞壞死 時細胞多表現為細胞腫脹，因此前向光散射高于正常，對側向光散射高于正常。

  尚寶生物 碘化丙啶PI染色液(50μg/ml)主要由PI、破膜劑等組成，經常用于培養的貼壁或懸浮細胞的細胞周 期與細胞凋亡檢測，亦可用于區分細胞凋亡和細胞壞死。PI染色液工作濃度為20～50μg/ml，不含RNase，*用 于RNA染色，細胞檢測含量范圍一般為0.1～1×10⁶之間。

產品內容:

自備材料：

1. 胰蛋白酶消化液

2. 流式細胞儀

3. PBS

4. 預冷固定液：預冷的70%乙醇或4%多聚甲醛

操作步驟（僅供參考）：

1. 細胞樣品的制備：

⑴貼壁細胞：

① 小心收集細胞培養液到一個無菌離心管內備用。

② 用胰蛋白酶消化細胞至可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時，加入前面收集的細胞培養液，吹打下所有的 貼壁細胞，并輕輕吹散細胞。

③ 收集上述細胞懸液到離心管內。

④ 4℃，1000g離心3～5min，使細胞沉到管底。小心吸取上清并丟棄，可留大約50μl培養液，以免吸走細胞。

⑤ 加入約1ml提前預冷的PBS，重懸細胞，并轉移至1.5ml無菌離心管。

⑥ 4℃，1000g離心3～5min，使細胞沉到管底。

⑦ 小心吸取上清并丟棄，可留大約50μl PBS，以免吸走細胞。

⑧ 輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。

⑵懸浮細胞：

① 4℃，1000g離心3～5min，使細胞沉到管底。

② 小心吸取上清并丟棄，可留大約50μl培養液，以免吸走細胞。

③ 加入約1ml提前預冷的PBS，重懸細胞，并轉移至1.5ml無菌離心管。

④ 4℃，1000g 離心3～5min，使細胞沉到管底。

⑤ 小心吸取上清并丟棄，可留大約50μl PBS，以免吸走細胞。

⑥ 輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。

2. 細胞的固定：

  加入1ml冰浴預冷70%乙醇中，輕輕吹打混勻，4℃條件下固定2h或更長時間。4℃固定12～24h 可能效果更佳。

3. 細胞的清洗：

①4℃，1000g 離心3～5min，使細胞沉到管底。

② 小心吸取上清并丟棄，可留大約50μl溶液，以免吸走細胞。

③ 加入約1ml提前預冷的PBS，重懸細胞，并轉移至1.5ml無菌離心管。

④4℃，1000g離心3～5min，使細胞沉到管底。

⑤ 小心吸取上清并丟棄，可留大約50μl PBS，以免吸走細胞。

⑥ 輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。

4. PI染色：

  在每個待檢細胞樣品中加入500μl配制好的PI染色工作液，輕輕重懸細胞沉淀，置于37℃避光水浴 30min。

5. 檢測與分析：

  用流式細胞儀在激發波長488nm波長處檢測紅色熒光，同時檢測光散 染色結果： 凋亡細胞G1峰左側出現亞二倍體細胞群的峰型，在光散射譜上，前向光散射低于正常，側向光散射高于正常。

注意事項：

1. 熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡快檢測。

2. 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

3. 在為了獲得細胞沉淀的離心的過程中，對于特殊細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當提高離心力或延長離 心時間。

4. 如果用于組織的細胞周期不細胞凋亡檢測，則必須把組織消化后，制備成單細胞懸液，才可以進行檢測。

5. 細胞凋亡時，凋亡細胞的標志之一是DNA可染行降低，但這種情況并是的，DNA含量的降低或者 DNA 與染料結合能力下降也會導致 DNA 可染行降低，在分析的時候應特別注意。

6. PI對人體有一定刺激性，請注意適當防護。

7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期： -20℃儲存，6個月有效。4℃儲存, 1 個月有效。