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超氧陰離子自由基檢測試劑盒(磺胺比色法)

產(chǎn)品貨號：BA1541

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品簡介：

      超氧陰離子自由基作為生物體代謝過程中產(chǎn)生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂 質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸 和聚不飽和脂肪酸等，使其交鏈或者斷裂，引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞， 與機體衰老和病變有很密切的關(guān)系， 清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。 生物體內(nèi)的分子氧可以經(jīng)過單電子還原轉(zhuǎn)變?yōu)槌蹶庪x 子自由基(O2-)，超氧陰離子自由基 既可以直接作用于蛋白質(zhì)和核酸等大分子，也可以衍生為羥自由基、單線態(tài) 氧、過氧化氫及 脂質(zhì)過氧物自由基等對細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能具有破壞作用的活性氧。

       超氧陰離子自由基檢測試劑盒(磺胺比色法)又稱超氧陰離子清除能力檢測試劑盒，其檢測原理是利用羥胺氧 化的方法可以檢測生物體系中超氧陰離子自由基(O2-)，即 超氧陰離子自由基(O2-)與羥胺反應(yīng)生成 NO2-，NO2- 在氨基苯磺酸和萘胺作用下反應(yīng)生成粉 紅色的偶氮物質(zhì)對-苯磺酸-萘胺，以分光光度計測定 530nm 處吸光度， 在一定范圍內(nèi)顏色 深淺與超氧陰離子自由基(O2-)成正比，根據(jù) NO2-反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線將 A530換算成 NO2-濃度， 再依據(jù)上述關(guān)系式即可計算出 O2-濃度，該試劑盒主要用于測定植物組織中的超氧陰離子自 由基含量或超氧陰 離子清除能力。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料： 

1、蒸餾水。

2、實驗材料：植物組織(大豆、綠豆、玉米等葉片)、血液、組織樣本等。

3、研缽或勻漿器。

4、離心管或試管。

5、低溫離心機。

6、恒溫箱或水浴鍋。

7、比色杯。

8、分光光度計。

操作步驟：（僅供參考）

1、準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取正常或逆境下的新鮮植物組織，清洗干凈，擦干，切碎，迅速稱取 1~1.5g，加入 2ml 預(yù)冷的 O2- Lysis buffer 后冰浴條件下勻漿或研磨，4℃ 10000g 離心 10min，上清液即為超氧陰離子自由基提取液，4℃保存 備用。

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，4℃保存，用于超氧 陰離子自由基的檢測。

③高活性樣品：如果樣品中含有較高濃度的超氧陰離子自由基，可以使用 O2 - Lysis buffer 進行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、配制系列 NO2-標(biāo)準(zhǔn)溶液：

取出 NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM)恢復(fù)至室溫后，NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1mM)按下表繼續(xù)稀釋：

 3、O2-加樣：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣 品中的超氧陰離子自由基濃度過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進行測定，樣品的檢測*設(shè)置平行管。

 4、O2-測定：以空白調(diào)零，比色杯光徑 1cm，分光光度計測定標(biāo)準(zhǔn)管、測定管 530nm 處吸光度(即為 A 標(biāo)準(zhǔn)、A 測定)。

計算：

      以系列 NO2-標(biāo)準(zhǔn)(1~6 號)含量(μM)為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)測定管的吸光 度進而計算 NO2-含量。根據(jù)如下公式計算具體樣品中超氧陰離子自由基(O2-)的含量： 植物組織樣品 O2-(μM/g)=2×n×VT/(W×VS)

      式中：2=NO2-與 O2-間的化學(xué)計量數(shù)；

      n=從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的 NO2-含量(μM) VT=超氧陰離子自由基提取液總體積(ml) W=樣品鮮重(g) VS=測定時 加入提取液體積(ml)

      血清、尿液等樣品 O2-(μM/ml)=2×n×N/VS

      式中：2=NO2-與 O2-間的化學(xué)計量數(shù)

      n=從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的 NO2-含量(μM) N=稀釋倍數(shù) VS=測定時加入提取液體積(ml)

注意事項 ：

1、 實驗材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用，應(yīng)存于 4℃。

2、 如果樣品中含有較多的葉綠素，會干擾測定結(jié)果，可在加入羥胺溶液 25℃水浴孵育 20min 后用等體積乙氧基乙烷萃取葉綠素，再行顯色反應(yīng)。

3、 如果沒有分光光度計，也可以使用普通的酶標(biāo)儀測定，但應(yīng)考慮酶標(biāo)儀的大檢測體 積。

4、 所測樣本的濃度過高，應(yīng)用 O2- Lysis buffer 稀釋樣品后重新測定。

有效期：6 個月有效，4℃運輸，4℃保存。