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熒光/光吸收法過氧化氫定量試劑盒

產品貨號：26310

產品規格：100 次/500 次

產品簡介：

      本試劑盒用于定量分析細胞及酶水平的過氧化氫含量。

      在過氧化物酶的存在下，Reagent A 能夠與過氧化氫以 1：1 的比例反應，生成物有紅色熒光，該熒光可在激 發光 571nm，發射光 585nm 處被監測（激發光亦可用 530-571nm 波長激發，發射光可用 580-590nm 監測）。

      本試劑盒少檢測限為 50nM 過氧化氫。

包裝清單:

操作步驟：

1. 普通樣品過氧化氫含量測定:

2. 用超純水將 10×Reaction Buffer 稀釋為 1×Reaction Buffer。

3. 于 96 孔板中每孔加入 94μl 1×Reaction Buffer。

4. 于 96 孔板中加入 5μl 樣品，不足 5μl 的用 1×Reaction Buffer 補足 5μl。

5. 于 96 孔板中加入 0.5μl Reagent A，0.5μl Reagent B。

6. 37℃避光孵育 5min。

7. 用酶標儀激發光 571nm，發射光 585nm 檢測（激發光亦可用 530-571nm 波長激發，發射光可用 580-590nm 監測），分析數據。

8. 可選：除步驟 6 所示熒光檢測，亦可在 560nm 處檢測吸光度以用于數據分析。

9. 背景扣除：除待測樣品孔，需做空白孔（用 5μl 1×Reaction Buffer 代替樣品）檢測背景值。

細胞內過氧化氫含量測定：

1. Reaction mixture 制備：每個樣品準備 100μLReaction mixture。包含：0.5μl Reagent A，0.5μl Reagent B， 10μl 10×KRPG Buffer，89μl 超純水。根據實驗樣品數，準備適量 Reaction mixture。

2. 將 100μl Reaction mixture 加入 96 孔板中，37℃避光孵育 5min 備用。

3. 細胞樣品制備：準備收集約 1.5×10 4個細胞于 1.5ml 離心管中，PBS 清洗后 3000rpm 離心 5min，

4. 棄上清。

5. 加入 20μL KRPG buffer 懸浮的細胞（約 1.5×10 4個細胞）于步驟 2 的 96 孔板中，37℃避光孵育 10min。 如需空白對照，以 20μL KRPG buffer 代替細胞，作為空白對照孔。

6. 用酶標儀激發光 571nm，發射光 585nm 檢測（激發光亦可用 530-571nm 波長激發，發射光可用 580-590nm 監測），分析數據。

7. 可選：除步驟 5 所示熒光檢測，亦可在 560nm 處檢測吸光度以用于數據分析。

注意事項 ：

1. Reagent A 和 Reagent B 為光敏試劑，請避光保存。

2. 待測樣品中，DTT 或β巰基乙醇濃度不得高于 10μM。

3. 待測樣品 pH 值需小于 8.5。

4. 建議每次使用前用過氧化氫做標準曲線。