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吖啶橙熒光染色試劑盒

產品貨號：R21805

產品規格：100T

產品簡介：

  吖啶橙( Acridine Orange,AO)屬于三環雜芳香燃料,可以標記 DNA、RNA,屬于異染性熒光染料。該染料具有膜 通透性,能透過細胞膜,使核 DNA 和 RNA 染色。因此 AO 常用于細胞內 DNA 和 RNA 進行檢測。AO 與核酸結合方式主要 有:1、插入性結合,AO 嵌入核酸雙鏈的堿基對之間種結合方式主要為 AO 與 DNA 的結合,其熒光發射峰為 530nm,激發 后呈綠色熒光;2、靜電吸引,帶正電荷的 AO 與單鏈核酸的磷酸根(帶負電荷)產生靜電間的吸引結合,這種結合方式 主要為 AO 與 RNA 的結合,其熒光發射峰為 640nm,激發后呈紅色熒光,少量結合會呈桔黃色或桔紅色熒光。因此,吖 啶橙嵌合到雙鏈 DNA 分子中顯綠色,與 DNA 單鏈或 RNA 結合時發桔黃色或橙紅色熒光吖啶橙染色試劑盒( Acridine Orange Detection Kit)主要由 Ao Stain、AO Stain Buffer 組成,常用于細胞凋亡的檢測。染色后在熒光顯微鏡 下觀察,吖啶橙可透過正常細胞膜,使細胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光;而在凋亡細胞中,因染色質固縮或斷裂為大 小不等的片斷,形成凋亡小體。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光或黃綠色碎片顆粒;而壞死細胞黃熒光減弱甚 至消失。吖啶橙染色常與 EB 染色合用雙染,EB 只染死細胞使之產生桔黃色熒光,由此可區分出正常細胞、凋亡細胞 及壞死細胞。

試劑包裝：

自備材料：

1.熒光顯微鏡

2.低速離心機

3.PBS

4.細胞計數板、

5.載玻片、蓋玻片

操作步驟(僅供參考)：

（一）AO 單獨染色

1.收集細胞(采用流式細胞儀檢測時,應先固定細胞),用 AO Stain Buffer(1×)清洗細胞 1 次,加入適量的 AO Stain Buffer(1×)重懸細胞,計數并調節細胞濃度至 10 6/ml。

2.取適量的細胞懸液和 Ao Stain,按照細胞懸液: Ao Stain=19:1 的比例混合,輕輕混勻。如果采用熒光顯微鏡下 觀察,一般取 95μl 細胞懸液和 5μl AO Stain 混合即可。

3.室溫避光染色 15min,滴加于載玻片上并加蓋玻片或上流式細胞儀分析。

4.熒光顯微鏡下觀察(激發濾光片波長 488nm,阻斷濾光片波長 515nm),計數并拍照。

染色結果：

正常細胞    細胞被均勻染成黃綠色熒光

凋亡細胞    染色質濃縮,細胞核碎裂成點狀,被染成大小與一、致密濃染的綠色顆粒

（二）AO/EB 雙染色

1.收集細胞,用 Ao Stain Buffer(1×)清洗細胞 1 次,加入適量的 Ao Stain Buffer(1×)重懸細胞,計數并調節細 胞濃度至 10 6/ml。

2.取適量的細胞懸液和 Ao Stain,按照細胞懸液 Ao Stain=19:1 的比例混合,并加人適量 EB 染色液,輕輕混勻。如 果采用熒光顯微鏡下觀察,一般取 95μl 細胞懸液和 5μl Ao Stain 混合即可。

3.室溫避光染色 15min,滴加于載玻片上并加蓋玻片。

4.熒光顯微鏡濾光片 515nm 觀察,計數并拍照。

染色結果：

正常細胞    均勻染成綠色熒光

壞死細胞    細胞桔黃色熒光

調亡細胞    染色質濃縮,細胞核碎裂,被染成大小不一、致密濃染的黃綠色 顆粒或見胞質芽狀突起

注意事項：

1.吖啶橙染色常與 EB 染色合用，可區分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞。

2.如有低溫離心機進行離心效果更佳，同事應注意減少試劑暴露于強光下的時間。

3.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：6 個月有效。