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Tricine-SDS-PAGE凝膠配制試劑盒 蛋白類
  • Tricine-SDS-PAGE凝膠配制試劑盒  蛋白類
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更新時(shí)間:2024-07-17 11:49:01

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
尚寶生物Tricine-SDS-PAGE凝膠配制試劑盒 蛋白類能夠較好的分離10KD以下的蛋白或多肽,是電泳法分離多肽的主要方法,30T一般可以配制30~35塊膠,具體配制的量應(yīng)根據(jù)器具大小決定。電泳分離后可直接考馬斯亮藍(lán)染色、銀染等。

Tricine-SDS-PAGE凝膠配制試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào):15195

 

產(chǎn)品規(guī)格:30T/150T

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

聚丙烯酰胺凝膠電泳 (Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresisSDS-PAGE)原理在于聚丙烯酰胺凝膠為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),具有分子篩效應(yīng)。它有兩種形式:非變性聚丙烯酰胺凝膠及 SDS-聚丙烯酰胺凝膠;非變性聚丙烯酰胺凝膠,在電泳的過程中,蛋白質(zhì)能夠保持完整狀態(tài),并依據(jù)蛋白質(zhì)的分子量大小、蛋白質(zhì)的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開,主要用于分離蛋白質(zhì)和寡核苷酸。常規(guī) SDS-PAGE 凝膠電泳適用于分離大分子蛋白,對(duì)于小分子量的蛋白或多肽,分辨率大大降低。

尚寶生物 Tricine-SDS-PAGE電泳能夠較好的分離10KD以下的蛋白或多肽,是電泳法分離多肽的主要方法,30T一般可以配制3035塊膠,具體配制的量應(yīng)根據(jù)器具大小決定。電泳分離后可直接考馬斯亮藍(lán)染色、銀染等。

 

產(chǎn)品組成:

名稱

30T

保存條件

試劑(A): 49.5%T 3%C

20ml

4℃

試劑(B): 49.5%T 6%C

60ml

4℃

試劑(C): Gel buffer

90ml

4℃

試劑(D): Glycerol

20ml

室溫

試劑(E): Ammonium Persulfate

0.3g

室溫

試劑(F): TEMED

2×1ml

4℃,避光

 

 

操作步驟(僅供參考)

  • 配制10%過硫酸銨(APS):直接在0.3g Ammonium Persulfate中加入3ml蒸餾水,充分溶解,分裝成小份儲(chǔ)存于-20℃4℃。注意:一般用1.5mlEP管分裝成0.5-1ml每支,-20℃保存,每支使用2-3次即棄用。短期使用時(shí),可保存于4℃1周有效。
  • 根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的凝膠濃度,按照附表配制分離膠:

將不同體積的蒸餾水、49.5%T 6%CGel bufferGlycerol加入到離心管中充分混合。

加入10%APSTEMED,立即渦旋混勻510s,以使溶液充分混勻。

在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液(1mm mini-gel,分離膠溶液加約4ml),然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層13cm的水層,使凝膠表面保持平整。

靜置,待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。

  • 根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的凝膠濃度,按照附表配制夾層膠:

去除覆蓋在分離膠上的水層,用濾紙將殘留的水盡量吸去。

將不同體積的蒸餾水、49.5%T 3%CGel buffer加入到離心管中混合。

加入10%APSTEMED,立即渦旋混勻510s,以使溶液充分混勻。

將適量的夾層膠溶液迅速加至分離膠的上面(對(duì)于1mmmini-gel,夾層膠溶液加約1ml),然后在夾層膠溶液上輕輕覆蓋一層12cm的水層,使凝膠表面保持平整。

靜置,待夾層膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。

 

  • 根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的凝膠濃度,按照附表配制濃縮膠:

去除覆蓋在夾層膠上的水層,用濾紙將殘留的水吸去。

將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%CGel buffer加入到離心管中混合。

加入10%APSTEMED,立即渦旋混勻510s,以使溶液充分混勻。

將梳子插入凝膠內(nèi),避免產(chǎn)生氣泡。

靜置,待凝膠聚合后,小心地拔出梳子,避免破壞加樣孔。進(jìn)行電泳操作。

  • 電泳

將電泳槽置于4℃或冰水浴中,外槽加入陽極緩沖液,內(nèi)槽加入陰極緩沖液,30V預(yù)電泳10min,將處理好的樣品加入點(diǎn)樣孔,30V電泳1h100V電泳至溴酚藍(lán)到達(dá)膠底部后停止電泳,進(jìn)行后續(xù)的考馬斯亮藍(lán)染色或電轉(zhuǎn)。

附表 Tricine-SDS-PAGE 凝膠配方表

成份

分離膠

夾層膠

濃縮膠

濃度/體積

20%/4.5ml   16.5%/4.5ml   15.5%/4.5ml

10%/2ml

10%/2ml

49.5%T 3%C

                      

0.407ml

0.16ml

49.5%T 6%C

1.82ml        1.5ml      1.395ml

Gel buffer

1.5ml         1.5ml      1.5ml

0.667ml

0.496ml

Glycerol

0.48ml        0.48ml     0.48ml

蒸餾水

0.7ml         1.02ml     1.125ml

0.926ml

1.344ml

10%APS

40μl         40μl      40μl

20μl

20μl

TEMED

5μl           5μl       5μl

3μl

3μl

 

 

注意事項(xiàng):

  • 過硫酸銨配制成10%APS溶液后應(yīng)當(dāng)-20℃保存,用2~3次,亦可4℃保存幾天。
  • TEMED易揮發(fā),使用后請(qǐng)蓋緊瓶蓋。另外凝膠凝聚的速度和溫度及光照關(guān)系密切。可通過適當(dāng)調(diào)節(jié)TEMED 的用量,控制在不同的室內(nèi)環(huán)境下凝膠凝聚的速度。
  • 配制聚丙烯凝膠的過程中,如果室溫較低,可以置于37℃放置,加速凝固。在液體混勻的時(shí)候應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。
  • 在分離膠上層加蒸餾水時(shí)要緩慢,速度不宜過快。
  • 49.5%T 3%C 49.5%T 6%C為不同比例的Acr-Bis,有輕微神經(jīng)毒性,請(qǐng)小心操作。

 

有效期:6個(gè)月有效。

 

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