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4CN顯色試劑盒(HRP顯色)
產(chǎn)品貨號(hào):T15230
產(chǎn)品規(guī)格:100ml/500ml
產(chǎn)品簡介:
4CN是4-氯-1-萘酚的縮寫,屬于辣根過氧化物酶(HRP)發(fā)色系統(tǒng),與DAB、TMB顯色原理類似。
4CN顯色試劑盒(HRP發(fā)色)其顯色原理是4CN與氧化物形成紫色沉淀,可以用于細(xì)胞或組織在免疫組化或原位雜交時(shí)結(jié)合的辣根過氧化物酶顯色,也可用于Western等結(jié)合有辣根過氧化物酶的膜的顯色檢測。
產(chǎn)品組成:
產(chǎn)品名稱 | 100ml | 500ml | 保存條件 |
試劑(A):4NC顯色液 | 100ml | 500ml | 4℃,避光 |
試劑(B):4NC氧化劑 | 2×1ml | 2×5ml | 室溫 |
自備材料:
1. 洗滌液
2. 蒸餾水
操作步驟(僅供參考):
1. 常規(guī)組織切片、細(xì)胞樣品、膜與辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體或其它形式的探針孵育后,用適當(dāng)洗滌液洗滌。對于檢測內(nèi)源性辣根過氧化物酶的組織或細(xì)胞樣品,在適當(dāng)固定后,也可用洗滌液洗滌。
2. 按4CN顯色液:4CN氧化劑=比例混合,即為4CN顯色工作液,即配即用。
3. 洗滌過組織后,去除洗滌液,加入適量4CN顯色工作液,確保覆蓋樣品。
4. 室溫避光孵育30min或更長時(shí)間,直至顯色至預(yù)期深淺。
5. 去除4CN顯色工作液,用蒸餾水清洗即可終止顯色反應(yīng)。
6. 對組織切片或細(xì)胞樣品,反應(yīng)終止后,如有必要可用中性紅染色液染色,便于觀察。對于膜染色,反終止后可室溫晾干避光保存。
注意事項(xiàng):
1. 4CN氧化劑易揮發(fā),應(yīng)密閉保存。
2. 顯色后易褪色,請注意避光,以減少染料分解。
3. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
常見問題及可能原因:
1. 背景顯色太深
①在免疫組化時(shí)如果背景顯色太深,考慮使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進(jìn)行封閉,例如選購適當(dāng)?shù)姆忾]液或使用和一抗相同來源的血清(10%)進(jìn)行封閉。也應(yīng)請注意選購經(jīng)過適當(dāng)吸附的二抗,以減小二抗的非特異性吸附。
②在進(jìn)行含內(nèi)源性過氧化氫酶的免疫組化時(shí),如果背景顯色太深,需注意滅活內(nèi)源性過氧化氫酶??梢栽?/span>4體積甲醇中加入1體積3%過氧化氫,混勻后用于內(nèi)源性過氧化氫酶的滅活。
③可以考慮縮短顯色時(shí)間,或降低二抗?jié)舛取?/span>
④選擇適當(dāng)強(qiáng)度的洗滌液,或延長洗滌時(shí)間。
2. 沒有顯色或顯色太弱
①當(dāng)提高一抗或二抗的濃度。檢測二抗效果,滴一滴稀釋二抗在膜上,檢測二抗是否可以被正常顯色。
②考慮使用更加靈敏的放大檢測體系,例如使用生物素檢測體系。
③適當(dāng)延長顯色時(shí)間,另外確定抗原修復(fù)是否對于使用的一抗是必需的。
有效期:6個(gè)月有效。
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