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紫外法蛋白定量試劑盒
產品貨號:15228
產品規格:250T/500T
產品簡介:
蛋白質分子中存在含有共軛雙鍵的酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸,使蛋白質在270~290nm波長范圍內具有吸收紫外光的性質,其中酪氨酸的最大吸收峰為275nm,色氨酸的最大吸收峰為280nm,苯丙氨酸的最大吸收峰為
257nm。在上述波長范圍內,蛋白質溶液的吸收值與其濃度呈正比,可作定量測定。
尚寶生物紫外法蛋白定量試劑盒優點是:操作迅速、簡便,不易受低濃度鹽類的干擾;缺點是與標準蛋白中
酪氨酸、色氨酸含量差異較大的蛋白質,準確性較差。樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸會干擾檢測結果。
產品組成:
名稱 | 250T | 500T | 保存條件 |
試劑(A): 蛋白稀釋液(10×) | 50ml | 100ml | 室溫 |
試劑(B): 蛋白標準(BSA) | 2×20ml | 3×20ml | -20℃ |
自備材料:
1. 分光光度計或酶標儀
2. 96孔板或離心管
操作步驟( 僅供參考) :
1. 用去離子水或蒸餾水稀釋蛋白稀釋液(10×)至1×,即為蛋白稀釋工作液。取1支20mg的蛋白標準,加入20ml蛋白稀釋工作液,即配制成蛋白標準(1mg/ml),-20℃保存。
2. 標準曲線法:取若干試管或96孔板,如下操作以分光光度法為例。選用1cm的石英比色皿,在280nm處以第1管作為調零點,分別檢測各管吸光度,以A280為縱坐標,以蛋白質濃度為橫坐標,繪制標準曲線。
試管號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
蛋白標準(1mg/ml) | 0 | 0.5 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 2.5 | 3.0 | 4.0 |
蛋白稀釋工作液(ml) | 4.0 | 3.5 | 3.0 | 2.5 | 2.0 | 1.5 | 1.0 | 0 |
蛋白濃度(mg/ml) | 0 | 0.125 | 0.250 | 0.375 | 0.500 | 0.625 | 0.750 | 1.000 |
取1ml待測蛋白加至3ml的蛋白稀釋工作液中,混勻,分光光度計或酶標儀測定A280。
根據標準曲線計算出樣品的蛋白濃度。
3. Lowry-Kalckar法(又稱280nm和260nm吸收差法):對于含有核酸的蛋白質,無需制作標準曲線。以蛋白稀釋工作液作為調零點,取1ml待測蛋白加至3ml的蛋白稀釋工作液中,混勻,分光光度計或酶標儀測定A280和A260。根據經驗公式計算出待測樣品的蛋白濃度,如果蛋白濃度過高應用蛋白稀釋工作液稀釋后再行檢測。
蛋白質濃度(g/L)=1.45×A280 -0.74× A280
4. Waddell法(又稱215nm和225nm吸收差法):對于蛋白質含量較少的溶液,適用于該法。取若干試管或96孔板,如下操作以分光光度法為例。以蛋白稀釋工作液作為調零點,取1ml蛋白標準(1mg/ml)加至3ml的蛋白稀釋工作液中,混勻,分光光度計或酶標儀測定A215和A225。以215nm與225nm吸光度值之差(D=A215-A225)為縱坐標,以蛋白濃度為橫坐標,繪制標準曲線,再測出未知樣品的吸收差,即可由標準曲線查出未知樣品的蛋白質濃度。或者不用制作標準曲線,直接按照如下經驗公式計算:
蛋白質濃度(g/L)=144×(A215-A225)。
注意事項:
1. 蛋白標準(BSA)粉末溶解于蛋白稀釋工作液,該液中含有防腐劑,不影響后續檢測,該蛋白標準液-20℃保存。
2. 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中,蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中,否者待測蛋白與蛋白標準中所含非蛋白成分不一致,有可能導致測定不準確。
3. 如果沒有分光光度計,也可以使用酶標儀測定,但應考慮根據比色皿的最小檢測體積。
4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期:12個月有效。蛋白標準配制成溶液后應-20℃凍存。
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