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紫外法蛋白定量試劑盒
  • 紫外法蛋白定量試劑盒
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貨物所在地:上海上海市

更新時間:2024-07-17 11:48:59

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尚寶生物紫外法蛋白定量試劑盒優點是:操作迅速、簡便,不易受低濃度鹽類的干擾;缺點是與標準蛋白中酪氨酸、色氨酸含量差異較大的蛋白質,準確性較差。樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸會干擾檢測結果。

紫外法蛋白定量試劑盒

產品貨號:15228

產品規格:250T/500T

產品簡介:

蛋白質分子中存在含有共軛雙鍵的酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸,使蛋白質在270290nm波長范圍內具有收紫外光的性質,其中酪氨酸的最大吸收峰為275nm,色氨酸的最大吸收峰為280nm,苯丙氨酸的最大吸收峰為

257nm。在上述波長范圍內,蛋白質溶液的吸收值與其濃度呈正比,可作定量測定。

尚寶生物紫外法蛋白定量試劑盒優點是:操作迅速、簡便,不易受低濃度鹽類的干擾;缺點是與標準蛋白中

酪氨酸、色氨酸含量差異較大的蛋白質,準確性較差。樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸會干擾檢測結果。

產品組成:

名稱

250T

500T

保存條件

試劑(A): 蛋白稀釋液(10×)

50ml

100ml

室溫

試劑(B): 蛋白標準(BSA)

2×20ml

3×20ml

-20

自備材料:

1. 分光光度計或酶標儀

2. 96孔板或離心管

操作步驟( 僅供參考)

1. 用去離子水或蒸餾水稀釋蛋白稀釋液(10×),即為蛋白稀釋工作液。取120mg的蛋白標準,加入20ml蛋白稀釋工作液,即配制成蛋白標準(1mg/ml)-20℃保存。

2. 標準曲線法:取若干試管或96孔板,如下操作以分光光度法為例。選用1cm的石英比色皿,在280nm處以第1管作為調零點,分別檢測各管吸光度,以A280為縱坐標,以蛋白質濃度為橫坐標,繪制標準曲線。

試管號

1

2

3

4

5

6

7

8

蛋白標準(1mg/ml)

0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

4.0

蛋白稀釋工作液(ml)

4.0

3.5

3.0

2.5

2.0

1.5

1.0

0

蛋白濃度(mg/ml)

0

0.125

0.250

0.375

0.500

0.625

0.750

1.000

1ml待測蛋白加至3ml的蛋白稀釋工作液中,混勻,分光光度計或酶標儀測定A280

根據標準曲線計算出樣品的蛋白濃度。

3. Lowry-Kalckar(又稱280nm260nm吸收差法):對于含有核酸的蛋白質,無需制作標準曲線。以蛋白稀釋工作液作為調零點,取1ml待測蛋白加至3ml的蛋白稀釋工作液中,混勻,分光光度計或酶標儀測定A280A260。根據經驗公式計算出待測樣品的蛋白濃度,如果蛋白濃度過高應用蛋白稀釋工作液稀釋后再行檢測。

蛋白質濃度(g/L)=1.45×A280 -0.74× A280

4. Waddell(又稱215nm225nm吸收差法):對于蛋白質含量較少的溶液,適用于該法。取若干試管或96孔板,如下操作以分光光度法為例。以蛋白稀釋工作液作為調零點,取1ml蛋白標準(1mg/ml)加至3ml的蛋白稀釋工作液中,混勻,分光光度計或酶標儀測定A215A225。以215nm225nm吸光度值之差(D=A215-A225)為縱坐標,以蛋白濃度為橫坐標,繪制標準曲線,再測出未知樣品的吸收差,即可由標準曲線查出未知樣品的蛋白質濃度。或者不用制作標準曲線,直接按照如下經驗公式計算:

蛋白質濃度(g/L)=144×(A215-A225)

注意事項:

1. 蛋白標準(BSA)粉末溶解于蛋白稀釋工作液,該液中含有防腐劑,不影響后續檢測,該蛋白標準液-20℃保存。

2. 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中,蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中,否者待測蛋白與蛋白標準中所含非蛋白成分不一致,有可能導致測定不準確。

3. 如果沒有分光光度計,也可以使用酶標儀測定,但應考慮根據比色皿的最小檢測體積。

4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期:12個月有效。蛋白標準配制成溶液后應-20℃凍存。


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