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改良Lowry法蛋白定量試劑盒

產品貨號：T15269

產品規格：500T/10000T

產品簡介：

目前常用的蛋白濃度檢測方法是：BCA蛋白定量試劑盒(BCA Protein Assay Kit)和Bradford蛋白定量試劑盒(Bradford Protein Assay Kit)。

尚寶生物改良Lowry法蛋白定量試劑盒是利用蛋白中肽鍵與銅離子結合成四配位基銅離子復合物，后者與Folin試劑(福林酚)反應，產生藍色比色物，用分光光度法(酶標儀或分光光度計)檢測750nm處吸光度，并與標準曲線比較，求得待測蛋白樣品的濃度，在1～1500μg/ml濃度范圍內有較好的線性關系。

產品組成：

自備材料：

1. 酶標儀或分光光度計

2. 96孔板或離心管

操作步驟（僅供參考）：

1. 取1ml蛋白標準配制液加入到蛋白標準(BSA)(20mg)中，充分溶解后配制成20mg/ml的蛋白標準溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白標準溶液應-20℃保存。

2. 取適量20mg/ml蛋白標準，稀釋至終濃度為1500μg/ml或所需濃度。如取75μl 20mg/ml 蛋白標準，加入925μl稀釋液，充分混勻，即配制1500μg/ml蛋白標準。

特別提示：待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中。例如待測蛋白溶解于蔗糖中，亦取20mg/ml蛋白標準溶解于蔗糖中。一般也可以用0.9%NaCl或PBS作為溶解BSA稀釋液。稀釋后的1500μg/ml蛋白標準也應-20℃長期保存。

3. 根據樣品數量，按Folin-Ciocalteu Reagent:ddH 2 O =1：1的比例配制 Folin-Ciocalteu工作液，充分混勻。

4. 根據樣品數量，按試劑(B1):試劑(B2):試劑(B3)=50:1:1 的比例配制改良Lowry Reagent工作液，充分混勻。例如取 10ml Lowry A、0.2ml Lowry B、0.2ml Lowry C，配制成10.4ml改良Lowry Reagent工作液。

5. 將1500μg/ml蛋白標準用稀釋待測樣品的溶液5倍梯度稀釋，濃度分別為 300μg/ml、60μg/ml、12μg/ml、2.4μg/ml、0μg/ml，各取40μl加到96孔板的標準品孔。

6. 加40μl待測蛋白樣品或稀釋液(空白對照)到96孔板的樣品孔中，如果標準品稀釋液與溶解待測蛋白樣本的溶液不同，應在待測蛋白樣本孔中加入40μl稀釋液；如果標準品稀釋液與溶解待測蛋白樣本的溶液相同，無需在待測蛋白樣本孔中加入40μl稀釋液。

7. 用多通道微量移液器快速將200μl配置好的改良Lowry Reagent工作液加入至各孔，立即在96孔板混勻器上混勻30s或手動輕輕混勻30s。室溫準確孵育10min。

8. 用多通道微量移液器快速將20μl新鮮配置的Folin-Ciocalteu工作液加至上述各孔中，立即在96孔板混勻器上混勻30s或手動輕輕混勻30s。加蓋以防止液體揮發，室溫準確孵育30min

9. 輕輕混勻96孔板，酶標儀或微量滴定板讀數儀測定750nm處吸光度，也可用分光光度計測定，但應考慮根據比色皿的最小檢測體積，檢測樣品數量亦相應減少。對比標準曲線，求得相應待測樣品的蛋白濃度。同時建議所以樣品(包括標準品)采用三復孔，求平均值。

注意事項：

1. 蛋白標準(BSA)粉末溶解于蛋白標準配制液后，即獲得蛋白標準原液，該原液中含有防腐劑，不影響后續檢測，該蛋白標準原液-20℃長期保存。

2. 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測蛋白與蛋白標準中所含非蛋白成分不一致，有可能導致測定不準確。

3. 如果沒有酶標儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但應考慮根據比色皿的最小檢測體積。應按比例適當加大改良Lowry Reagent工作液的用量使總體積不小于最小檢測體積，樣品和標準品的用量亦相應按比例放大。使用分光光度計測定蛋白濃度時，每個試劑盒可以測定的樣品數量可能會顯著減少。

4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：6個月有效。蛋白標準配制成溶液后應-20℃凍存。