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貨物所在地:上海上海市
更新時(shí)間:2024-07-17 11:48:36
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蛋白快速銀染試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):15138
產(chǎn)品規(guī)格:20T
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:蛋白快速銀染試劑盒(Protein Fast Silver Stain Kit)是一種快速的可用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白銀染染色的試劑盒,該試劑盒含有增敏步驟,可明顯降低背景。其優(yōu)點(diǎn)還在于:1、操作簡(jiǎn)單、快速;2、可用于2D凝膠的銀染,并可進(jìn)行后續(xù)的質(zhì)樸檢測(cè);3、目的條帶清晰;4、不含甲醇。Protein Fast Silver Stain Kit與Protein SilverStain Kit相比,前者操作速度更快,但檢測(cè)靈敏度可能低于后者,尤其是在檢測(cè)小分子量蛋白質(zhì)的時(shí)候。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成:
試劑名稱(chēng) 20T 保存條件
試劑(A): Silver Stain Sensitizer(500×) 2×1ml 室溫
試劑(B): Silver Stain(100×) 10ml 室溫,避光
試劑(C): Silver Stain Developer(5×) 2×100ml 室溫,避光
試劑(D): Silver Stain Stop Buffer(10×) 100ml 室溫
自備材料:
1. 水平搖床或側(cè)擺搖床
2. 去離子水(超純)
3. 乙醇、冰乙酸
操作步驟 (僅供參考) :
1. 準(zhǔn)備工作:以下操作以 8.5×5.5cm、厚度為 1.0mm 的凝膠為例,以凝膠全部浸沒(méi)到溶液為準(zhǔn),一般用量是25ml,對(duì)于凝膠體積較大的,各溶液的使用量需按凝膠體積比例放大。整個(gè)銀染過(guò)程應(yīng)在搖床上進(jìn)行,搖床轉(zhuǎn)速控制在 60~70rpm。提前配制固定液,即按無(wú)水乙醇:冰乙酸:去離子水=5:1:4 的比例配制。提前配制洗滌液,即按無(wú)水乙醇:去離子水=1:4 的比例配制。
2. 水洗:電泳結(jié)束后,取凝膠放入去離子水中清洗 2 次,每次 5min。
3. 固定:取凝膠放入 50~100ml 固定液中,在搖床上室溫?fù)u動(dòng) 15~20min,重復(fù)固定步驟 1 次。
4. 洗脫:取凝膠放入洗滌液中清洗 2 次,每次 5min。
5. 水洗:去離子水清洗凝膠 2 次,每次 5min。
6. 增敏:配制銀染增敏工作液,即取 Silver Stain Sensitizer(500×)0.1ml 加入到 50ml 去離子水中,混勻,即 1×Silver Stain Sensitizer,一般應(yīng) 2h 內(nèi)用完。室溫下用 1×Silver Stain Sensitizer 孵育凝膠 2min,立即用去離子水清洗凝膠 2 次,每次 1min。
7. 銀染:配制銀染工作液,即取 Silver Stain(100×)0.5ml 加入到 50ml 去離子水中,混勻,即得 1×Silver Stain,一般應(yīng) 2h 內(nèi)用完。取凝膠入 1×Silver Stain,在搖床上室溫?fù)u動(dòng) 10~20min。
8. 水洗:棄液,在搖床上用去離子水清洗凝膠 2 次,每次 30s,搖動(dòng)速度在 60~70rpm??偟乃磿r(shí)間應(yīng)控制在 1.5min 內(nèi)。
9. 顯影:配制銀染顯影工作液,即取 Silver Stain Developer(5×)10ml 加入到 40ml 去離子水中,混勻,即 1×Silver Stain Developer,一般應(yīng) 30min 內(nèi)用完。清洗凝膠后,立即置于 1×Silver Stain Developer 中,室溫孵育 2~10min,直至蛋白條帶清晰可見(jiàn)。一般顯色 30s 后就會(huì)出現(xiàn)棕色沉淀,繼續(xù)顯影 2~3min,亦可延長(zhǎng)至5min 以上,如果顯影效果不佳,可重新更換 1×Silver Stain Developer 繼續(xù)顯影。
10. 迅速用去離子水清洗凝膠以避免顯影過(guò)度,背景染色。立即加入銀染終止液,搖床上搖動(dòng) 10min,以終止顯色反應(yīng)。(配制銀染終止液,即取 Silver Stain Stop Buffer(10×)10ml 加入到 90ml 去離子水中,混勻,即 1×Silver Stain Stop Buffer,一般應(yīng) 24h 內(nèi)用完。)
11. 保存:棄終止液,加入去離子水 50ml,搖床上搖動(dòng) 2~5min,棄液。短期保存于新鮮去離子水,長(zhǎng)期保存可以制備干膠。
注意事項(xiàng):
背景過(guò)深:①顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng);②洗滌不充分;③凝膠中殘留物質(zhì)未去除干凈;④去離子水的純度過(guò)低。
2. 蛋白條帶較淺:①蛋白的半胱氨酸含量過(guò)低;②銀染后水洗時(shí)間過(guò)長(zhǎng);③蛋白量較低;④固定后的洗滌時(shí)間不夠,導(dǎo)致乙酸殘留。
3. 凝膠上出現(xiàn)雜質(zhì)或非蛋白的印跡:①凝膠沒(méi)有被充分浸沒(méi),應(yīng)加入足量溶液;②容器沒(méi)有清洗干凈;③凝膠接觸金屬物質(zhì);④指紋或其他壓跡。
4. 本染色液呈酸性,有輕微腐蝕性,使用時(shí)請(qǐng)作必要防護(hù)。5. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。有效期:
6 個(gè)月有效。
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