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磷酸化蛋白提取試劑盒
產品貨號:15231
產品規格:50T/100T
產品簡介:
磷酸化蛋白提取試劑盒用于哺乳動物組織和細胞中提取胞質蛋白,試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑,作用較為強烈,可獲得總蛋白,可用于免疫印跡實驗等基礎研究實驗,由于含有上述的酶抑制劑,不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。
本品僅用于科研。
產品組成:
試劑名稱 50T 100T 保存條件
裂解液 50mL 100mL 2~8℃
磷酸酶抑制劑(100×) 0.5mL 1mL -20℃
蛋白酶抑制劑(100×) 0.5mL 1mL -20℃
PMSF(100×) 0.5mL 1mL -20℃
操作步驟:
在 1mL 的冷裂解液中各加入 10µL 的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和 PMSF;混勻,放置在冰上備用;
組織總蛋白的提取
1) 稱取 0.1g 的新鮮組織,放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處,用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎,然后加入 0.5-1mL的新配置的裂解液,研磨直至沒有明顯的組織塊,這個過程注意冰上操作;
2) 將組織勻漿液移入 1.5mL 的 EP 管中,4℃12000g 離心 30min;
3) 吸取上清至新的管中;
4) 進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。(提取好的蛋白建議保存于-80℃,即用即取,避免反復凍融,避免長時間儲存。)
2. 細胞總蛋白的提取
1) 裂解液的用量:107個細胞需要裂解液 1mL
2) 貼壁細胞:棄去培養基,用冷的 PBS 洗兩次,棄去 PBS,然后加入計算好的細胞裂解液;在冰上用細胞刮刀進行刮離細胞,將刮離的細胞裂解液移入 EP 管中,顛倒裂解 20-30min。
3) 懸浮細胞:4℃400g 離心收集細胞,用冷的 PBS 洗兩次細胞,同樣按細胞數加入裂解液,渦旋 10s,放置冰上裂解 10min,重復 3-4 次;
4) 裂解完畢之后,將細胞裂解液 4℃12000g 離心 30min;
5) 將上清移入新的 EP 管中;進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。(提取好的蛋白建議保存于-80℃,即用即取,避免反復凍融,避免長時間儲存。)
注意事項:
1. 實驗過程,所有試劑都要需要預冷或者即融,保證操作過程中的低溫環境。
2. PSMF(有毒)現用現加,因為 PMSF 在水溶液中會快速降解。
有效期:12 個月有效。
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