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細(xì)胞核提取試劑盒
  • 細(xì)胞核提取試劑盒
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更新時(shí)間:2024-08-29 15:32:41

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細(xì)胞核提取試劑盒用于從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的細(xì)胞核。適合于動(dòng)物軟組織(肝或腦組織)和硬組織(肌肉)以及培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核的制備。其制備物產(chǎn)量高,可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。

細(xì)胞核提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)10258

產(chǎn)品包裝50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

細(xì)胞核提取試劑盒用于從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的細(xì)胞核。適合于動(dòng)物軟組織(肝或腦組織)和硬組織(肌肉)以及培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核的制備。其制備物產(chǎn)量高,可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。

產(chǎn)品組成:

產(chǎn)品組成

50T

100T

Lysis Buffer

100ml

200ml

Reagent A

2.5ml

5ml

Medium Buffer

25ml

50ml

Store Buffer

5ml

10ml

操作步驟
1. 樣本處理

a. 組織勻漿:稱取100~200mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等,PBS或生理鹽水沖洗,洗凈血水,濾紙吸干,用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL預(yù)冷的Lysis Buffer,再加入50µL Reagent A0℃冰浴中上下研磨組織20次;有未研磨開(kāi)的組織,可用雙層紗布過(guò)濾。

b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿:消化細(xì)胞,PBS洗滌,800g離心5~10min收集細(xì)胞,計(jì)數(shù)。每次提取需要5 ×107個(gè)細(xì)胞,加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞,再加入50µL Reagent A,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi),0℃冰浴研磨細(xì)胞20~30次。

2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管中,4℃700g離心5min。細(xì)胞核沉淀在收集管底部,棄上清。加入 0.5 mL 冰預(yù)冷的 Lysis Buffer 重懸沉淀。

3. 取另一新離心管內(nèi)加入0.5 mL Medium Buffer,吸取上一步的重懸液,沿管壁小心地加入到此離心管中,置于Medium Buffer之上,4℃700 g 離心5min。細(xì)胞核沉淀在管底。

4. 棄上清,在細(xì)胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細(xì)胞核沉淀,1000g離心10min ,棄上清,得到較純的細(xì)胞核沉淀。

5. 50-100µL Store Buffer或合適的反應(yīng)緩沖液重懸細(xì)胞核沉淀,立即使用或-70℃保存。

注意事項(xiàng):

1. 為保證獲得完整的細(xì)胞核,務(wù)必做到:第一,全程低溫操作;第二,快速;第三,在不破壞亞細(xì)胞器的情況下破碎細(xì)胞,這是制備細(xì)胞核的最關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比,培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在用玻璃勻漿器勻漿時(shí)較難破壁,因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴(yán)密的研杵上下研磨培養(yǎng)細(xì)胞。

2. 以離心力g計(jì)算正確的離心速度,不同的離心機(jī)可據(jù)此精確計(jì)算離心速度。

3. 進(jìn)行Western Blot2D-膠電泳,可直接加入上樣緩沖液裂解細(xì)胞核。

轉(zhuǎn)速與離心力換算:

G1.11×(10-5)×R×[rpm]2

G為離心力,一般以g(重力加速度)的倍數(shù)來(lái)表示;[rpm]2即:轉(zhuǎn)速的平方; R為半徑,單位為厘米。

保存條件:

短期使用可4℃儲(chǔ)存,長(zhǎng)期保存請(qǐng)置于-20℃-70℃



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