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哺乳動物基因組DNA抽提試劑盒
  • 哺乳動物基因組DNA抽提試劑盒
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貨物所在地:上海上海市

更新時間:2024-08-29 15:32:40

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哺乳動物基因組DNA抽提試劑盒(Mammalian genomic DNA extraction kit)采用經典的蛋白酶K處理法,可以抽提到100~150kb以上的基因組 DNA,提取的基因組DNA可用于Southern雜交、基因組DNA的PCR擴增及基因組DNA文庫的構建等。該試劑盒的提取效率大致為,從1g組織可以提取到約150~200μg 100kb以上的基因組DNA,從10 ~10 Hel

哺乳動物基因組DNA抽提試劑盒

產品貨號:11065

產品規格:50T/100T

產品簡介:

用分子生物學技術研究復雜的基因組,首先要求制備純凈的高分子質量DNA,一般分為兩個步驟,先裂解細胞、溶解DNA,接著采用酶學或化學方法去除蛋白、RNA以及其他大分子。

尚寶生物 哺乳動物基因組DNA抽提試劑盒(Mammalian genomic DNA extraction kit)采用經典的蛋白酶K處理法,可以抽提到100~150kb以上的基因組DNA,提取的基因組DNA可用于Southern雜交、基因組DNA的PCR擴增及基因組DNA文庫的構建等。該試劑盒的提取效率大致為,從1g組織可以提取到約150~200μg 100kb以上的基因組DNA,從10 ~10 Hela細胞可以提取到約5~50μg 100kb以上的基因組DNA。該試劑盒僅用于科研領域,不適用于臨床診斷或其他用途。

產品組成:


試劑盒內容 50T 100T 保存條件試劑(A): 樣品裂解液 50ml 100ml 4℃試劑(B): 蛋白酶K溶液 150μl 300μl -20℃,避光試劑(C): 乙酸銨溶液 10ml 20ml 室溫試劑(D): Nuclease Free Water 10ml 20ml 室溫自備材料:1. 組織或培養細胞2. PBS3. 無水乙醇、70%乙醇4. 25:24:1 酚/氯仿/異戊醇

操作步驟 (僅供參考) :


1. 準備樣品:①組織樣本:切下組織并立即剪成小塊,置于液氮中凍結。將 100mg~1g 凍結的組織用預冷的研缽和研杵研碎或用錘子將其搗成碎末。培養細胞:收集貼壁生長或懸浮生長細胞培養液,貼壁生長細胞需先用胰蛋白酶消化液消化,再用 PBS 清洗一次。4℃離心機,1000~2000g 離心 1~2min,棄上清。用 1~10ml 預冷的 PBS 再次懸浮離心,如此 2 次洗滌。


2. 每 1ml 樣品裂解液加入 5μl 的蛋白酶 K 溶液,混勻。每 50mg 組織或 5×107 細胞用 0.5~0.6ml 樣品裂解液懸浮,懸浮應*,不應留下結塊。


3. 充分混勻,50℃振蕩下溫育 12~18h 或過夜。


4. 加入等體積 25:24:1 酚/氯仿/異戊醇,輕輕混合,盡可能減少對 DNA 的剪切。


5. 吸出酚相及中間相(可以吸除少量靠近中間相的水相液體),剩余的水相用等體積酚/氯仿/異戊醇再抽提一次。重復該步驟 1 次。


6. 吸取上層液(水溶液)250~300μl 至新 EP 管中,加入等體積無水乙醇和 1/4 體積的乙酸銨溶液,顛倒混勻數次。


7. 4℃ 10000g 1min,棄上清。


8. 加入 70%乙醇,4℃ 10000g 1min,棄上清。重復該步驟一次。


9. 盡量吸除殘余的乙醇,空氣干燥,等到不到明顯液體時,立即加入 50~100μl Nuclease Free Water 溶解 DNA,4℃或-20℃保存。注意:不可過分干燥基因組 DNA 沉淀,否則會極難溶解。如果發現 DNA 沉淀難以溶解,可以在 4℃用搖床緩慢搖動過夜,以溶解 DNA 沉淀。


10. A 260 /A 280 處檢測 DNA 純度,高純度的 DNA 一般 A 260 /A 280>1.8。


注意事項:


1. 如果打算提取大片段的基因組 DNA,應盡量避免基因組 DNA 的物理性剪切。例如避免劇烈振蕩含有基因組DNA 的樣品,可以用剪掉槍頭尖的槍頭吸取基因組 DNA 的樣品。


2. 準備細胞樣品時,如果細胞量過少(<3×107 ),應 0.3ml 含蛋白酶 K 的樣品裂解液。


3. 為避免高分子質量 DNA 被剪切,可以不采用乙醇沉淀 DNA,可用透析袋替代乙醇:在 100 倍體積的 TE buffer中至少透析 2 次,所用取全部時間應>24h。


4. 不可過分干燥基因組 DNA 沉淀,否則會極難溶解。5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


有效期:6 個月有效。


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