當前位置:> 供求商機> λ噬菌體基因組DNA提取試劑盒(PEG沉淀法)
λ噬菌體基因組DNA提取試劑盒(PEG沉淀法)
產品貨號:11137
產品規格:50T/100T
產品簡介:
λ噬菌體是最早使用的克隆載體,其基因組是長度約為50kb的雙鏈DNA分子,其在宿主細胞由兩種生活途徑:1、裂解生長:環狀DNA分子在細胞內多次復制,合成大量噬菌體基因產物,裝配成噬菌體顆粒,裂解宿主菌再進行下一次感染;2、溶源性生長:感染細胞內λ噬菌體DNA整合到宿主菌染色體DNA中與之一起復制,并遺傳給子代細胞,宿主細胞不裂解。科研人員常常利用λ噬菌體裂解生長的特點,培養獲取大量的λ噬菌體顆粒,并提取λ噬菌體DNA。噬菌體載體廣泛用于文庫篩選,目的克隆培養獲得大量的噬菌體顆粒需要提取λ噬菌體DNA來開展測序等后續工作。λ噬菌體裂解培養物離心后的上清,首先用RNase A /DNase混合酶消化去除殘留的宿主菌DNA/RNA,沉淀收集噬菌體,通過酚異戊醇等提取,殘留碎片通過沉淀離心去除,通過一系列快速的漂洗、離心的步驟,將鹽、細胞代謝物、蛋白等雜質去除,獲得 DNA 的量很高,但是純度一般,但是足夠用于大
多數分子生物學實驗。
尚寶λ噬菌體基因組DNA提取試劑盒(PEG沉淀法)是簡便的λ噬菌體基因組DNA的試劑盒,其提取原理是通過 PEG沉淀、酚異戊醇等提取,殘留碎片通過沉淀離心去除,通過一系列快速的漂洗、離心步驟,將鹽、細胞代謝物、蛋白等雜質去除,即可獲得λ噬菌體基因組DNA,可進行酶切、PCR等下游實驗。僅用于科研領域,不用于臨床診斷或治療。
產品組成:
產品名稱 | 50T | 100T | 保存條件 |
試劑(A): RNase A | 10mg | 20mg | -20℃ |
試劑(B): DNaseⅠ | 10mg | 20mg | -20℃ |
試劑(C): 噬菌體沉淀液 | 200ml | 400ml | 4℃ |
試劑(D): SM buffer | 50ml | 100ml | 4℃ |
試劑(E): 噬菌體裂解液 | 2ml | 4ml | 室溫 |
試劑(F): 蛋白清除液 | 100ml | 200ml | 4℃,避光 |
試劑(G): 噬菌體漂洗液 | 100ml | 200ml | 室溫 |
試劑(H): TE buffer | 5ml | 10mg | 室溫 |
自備材料:
1. 離心管
2. 低溫離心機、搖床
3. 70%乙醇
操作步驟(僅供參考): 以下操作以10ml噬菌體感染細菌培養上清液為例。
1. 準備工作:向RNase A和DNase I分別加入1ml的TE buffer吹打,顛倒混勻,充分溶解RNase A和DNase I后,按照每次使用量分裝-20℃凍存,6個月有效。
2. 將0.1~0.5%氯仿處理后的λ噬菌體感染的12ml液體培養液轉移至離心管,8000~10000g離心10min,去除細菌碎片,取上清液。一般建議8000g離心,如果效果不佳可以考慮10000g,但轉速過高容易導致噬菌體也沉淀至管底,降低產量。
3. 取10ml上清液,加入5μl RNase A和10μl DNase I,充分混勻,37℃培養30min。
注意:噬菌體培養上清液會因生長和裂解情況不同致使殘留的RNA/DNA量不液不同,RNase/DNase消化過度,可能減少產量;消化不*,DNA、RNA可粘走部分噬菌體,一般RNase可以進行調整,可根據實際情況適當調節用量和消化時間。
4. 向上清液中加入4ml噬菌體沉淀液,搖勻至溶解,冰浴1h或4℃過夜。
5. 4℃ 10000g 離心20min,棄上清液。
6. 加入1ml SM buffer充分清洗管壁及沉淀,轉移至新的離心管或微量離心管,加入40μl噬菌體裂解液,68℃培養 15min。
7. 加入等體積蛋白清除液,輕輕混勻,12000g離心5min,取上清液。
8. (備選步驟)轉移上清液至新的離心管中,加入等體積預冷的噬菌漂洗液,輕輕混勻,-20℃孵育1h,4℃ 12000g 離心10min,棄上清液。
9. 加入適量的70%乙醇溶液,混勻,4℃ 8000g離心8min,棄上清液。如果有必要,可以重復1次該清洗步驟。
10. 室溫自然干燥DNA,加入適量TE buffer,-20℃保存。TE buffer體積越大,DNA濃度越低。
注意事項:
1. 用于裂解的噬菌體、宿主菌越新鮮,裂解越好、收獲量越大。
2. 液體培養裂解時,到了時間裂解還沒發生,可適當的提高溫度或加大振搖速度。
3. RNase/DNase消化過度,可能減少產量;消化不*,可粘走部分噬菌體。
4. 噬菌體裂解液在低溫下易結晶析出白色物質,可37℃溫浴至*溶解。
有效期:6個月有效。
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業自行提供,信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業負責,化工儀器網對此不承擔任何保證責任。
溫馨提示:為規避購買風險,建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。