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DNA病毒基因組提取試劑盒
  • DNA病毒基因組提取試劑盒
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貨物所在地:上海上海市

更新時間:2024-08-29 15:32:34

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DNA病毒基因組提取試劑盒適合于從血清、細胞上清、淋巴液中提取DNA病毒基因組,不適合于RNA病毒基因組的提取。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規操作,包括酶切、PCR、文庫構建、Southern雜交等實驗。

DNA病毒基因組提取試劑盒

產品貨號:10268

產品規格:50T/100T

產品簡介:

DNA病毒基因組提取試劑盒適合于從血清、細胞上清、淋巴液中提取DNA病毒基因組,不適合于RNA病毒基因組的提取使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規操作,包括酶切、PCR、文庫構建、Southern雜交等實驗。

產品組成:

試劑名稱

50T

100T

蛋白酶K

1ml

1ml×2

溶液V

25ml

50ml

漂洗液

15ml

15ml×2

洗脫液

10ml

20ml

吸附柱

50

100

收集管

50

100

操作步驟(僅供參考)

使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1. 取病毒上清液0.5ml12000rpm離心5min,盡量吸盡上清使用,棄去沉淀。

2. 向病毒上清中加入20ul的蛋白酶K10mg/ml),充分混勻,65℃消化10-20min,期間可顛倒離心管混勻數次。

3. 向管中加入500ul溶液V,充分混勻。再向管中加入400ul無水乙醇,充分混勻,此時可能會出現絮狀沉淀,不影響DNA的提取,可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,靜置2min。(吸附柱的最大容積為750ul,可分兩次加入。一次吸附完離心后再將余下的混合液體加入柱中靜置離心。)

4. 12000rpm離心2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

5. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

6. 向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

7. 12000rpm離心2min,將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除否則漂洗液中的乙醇會影響后續的實驗如酶切、PCR等。

8. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50ul-100ul65℃水浴預熱的洗脫液,室溫放置5min12000rpm離心1min

9. 離心所得洗脫液再加入吸附柱中,室溫放置2min12000rpm離心2min,即可得到高質量的病毒基因組DNA

注意事項:

1. 蛋白酶K需放置-20℃保存。

2. 樣品應避免反復凍融,否則會導致提取的DNA片段較小且提取量也下降。

3. 若溶液V中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解再使用,不影響效果。

4. 洗脫緩沖液的體積最好不少50ul,體積過小會影響回收效率。洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響,若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調至此范圍)pH值低于7.0會降低洗脫效率。 DNA產物應保存在-20℃,以防DNA降解。

5. DNA濃度及純度檢測:得到的基因組DNA片段的大小與病毒的保存條件和種類等因素有關。D260值為1.0相當于大約50ug/ml雙鏈DNA40ug/ml單鏈DNAOD260/OD280比值應為1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響光吸收值,但并不表示純度低。

6. 如果病毒含量過低,最后提取的基因組DNA電泳可能無法檢測到,但 PCR等其他實驗還會有結果。

有效期室溫(15℃-25℃) 干燥保存,復檢期12個月,2℃-8℃保存時間更長。



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