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柱式細(xì)胞基因組提取試劑盒
  • 柱式細(xì)胞基因組提取試劑盒
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貨物所在地:上海上海市

更新時(shí)間:2024-08-29 15:32:34

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柱式細(xì)胞基因組提取試劑盒采用優(yōu)化的緩沖體系使裂解液中的DNA高效特異的結(jié)合到硅基質(zhì)離心吸附柱上,PCR和其他酶促反應(yīng)的抑制劑可通過兩步洗滌步驟被有效去除,最后使用低鹽緩沖液或水洗脫,即可得到高純度DNA。純化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文庫構(gòu)建、Southern Blot、分子標(biāo)記等下游實(shí)驗(yàn)。

柱式細(xì)胞基因組提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào):28104

產(chǎn)品規(guī)格:50/100/200

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

   柱式細(xì)胞基因組提取試劑盒適合于從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中提取高純度總DNA。本品可純化獲得分子量最大為50 kbDNA片段,純化過程不需使用苯酚或氯仿等有毒溶劑,無需乙醇沉淀。本試劑盒采用優(yōu)化的緩沖體系使裂解液中的DNA高效特異的結(jié)合到硅基質(zhì)離心吸附柱上,PCR和其他酶促反應(yīng)的抑制劑可通過兩步洗滌步驟被有效去除,最后使用低鹽緩沖液或水洗脫,即可得到高純度DNA。純化得到的DNA可以直接用于酶切、PCRReal-Time PCR、文庫構(gòu)建、Southern Blot、分子標(biāo)記等下游實(shí)驗(yàn)。

包裝清單:

產(chǎn)品名稱

50次包裝

100次包裝

200次包裝

儲(chǔ)存條件

BufferGL

10ml

20ml

40ml

室溫

Buffer PS

10ml

20ml

40ml

室溫

Buffer PW

9ml

18ml

36ml

室溫

Buffer EB

5ml

10ml

20ml

室溫

Spin Columns

50個(gè)

100個(gè)

200個(gè)

室溫

Collection Tubes

50個(gè)

100個(gè)

200個(gè)

室溫

自備試劑:使用前Buffer PW 50次加入36ml無水乙醇/100次加入72ml無水乙醇/200次加入144ml無水乙醇。

操作步驟:

材料處理:

1. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)先處理為細(xì)胞懸液(最大提取量為5×106個(gè)細(xì)胞),2000rpm400×g)離心5分鐘,棄盡上清,加200 μl Buffer GL,振蕩至樣品*懸浮。

2. 如需去除RNA,可在上述步驟完成后,加入4μl的濃度為100 mg/mlRNase A溶液,渦旋15秒。劇烈渦旋震蕩并用移液器吹打充分混勻,室溫放置5-10分鐘。

3. 柱平衡:向已裝入收集管(Collection Tubes)中的吸附柱(Spin Columns)中加入200μl Buffer PS12000 rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

4. 將步驟3所得溶液短暫離心,全部加入到已裝入收集管的吸附柱(Spin Columns)中,若一次不能加完溶液,可分多次轉(zhuǎn)入。12000 rpm離心1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

5. 向吸附柱中加入450 μl Buffer PW(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇),12000 rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱放回收集管中。  注意:如果純化的DNA用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn)(例如平末端連接或直接測(cè)序),建議加入Buffer PW靜置2-5分鐘再離心。

6. 重復(fù)步驟5

7. 12000 rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液。

注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除,乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)(酶切、PCR等)。8.將吸附柱放到一個(gè)新的1.5 ml離心管(自備)中,向吸附膜中間位置懸空滴加50μl Buffer EB,室溫放置2分鐘。12000 rpm離心1分鐘,收集DNA溶液。-20℃保存DNA

注意:1)洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液,應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5之間(可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍)。2)為了提高基因組提取量,可將離心得到的溶液重新加到吸附柱中,室溫放置2分鐘,12000 rpm離心1分鐘。3)洗脫體積不應(yīng)小于30μl,體積過少會(huì)影響回收效率。

注意事項(xiàng)

1. 第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在Buffer PW中加入無水乙醇。

2. 所有離心步驟均可室溫下進(jìn)行。



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