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革蘭氏陽性菌基因組DNA提取試劑盒產品貨號：26228產品規格：50T/100T產品簡介：本試劑盒采用可以特異性結合DNA的離心吸附柱和*的緩沖液系統，提取革蘭氏陽性菌基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質材料為本公司*新型材料，能夠高效專一吸附DNA，可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。提取的基因組DNA片段大，純度高，質量穩定可靠。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規操作，包括酶切、 PCR、文庫構建、Southern雜交等實驗。產品組成：試劑名稱 50T 100T溶菌酶 0.3g 0.5gRNase A 1ml 1ml×2蛋白酶 K 1ml 1ml×2溶液 A 10ml 20ml溶液 B 10ml 20ml漂洗液 15ml 15ml×2洗脫液 15ml 30ml吸附柱 50 個 100 個收集管 50 個 100 個操作步驟：使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。1. 取細菌培養液 1ml，12000rpm 離心 1min.，盡量吸除上清。2. 向菌體中加入 200ul 終濃度為 20mg/ml 的溶菌酶，用溶菌酶干粉加入緩沖液 20 mM Tris, pH 8.0；2 mMNa2-EDTA；1.2% Triton X-100，37℃處理 30min 以上。（如果需要去除 RNA，可加入 20ul RNase A（10mg/ml）溶液）3. （可選作）向上述溶液中加入 200ul 溶液 A，振蕩或用移液器吹打使菌體充分懸浮，室溫放置 30min-60min。4. 向管中加入 20ul 的蛋白酶 K (10mg/ml)，充分混勻，55℃消化 30-60min，消化期間可顛倒離心管混勻數次，直至樣品消化*為止，此時可見菌液呈清亮粘稠狀。5. 向管中加入 200ul 溶液 B，充分顛倒混勻，如出現白色沉淀，可于 75℃放置 15-30min，沉淀即會消失，不影響后續實驗。如果溶液未變清亮，說明樣品消化不*，可能會導致 DNA 的提取量以及純度降低，還可能堵塞吸附柱。6. 向管中加入 200ul 無水乙醇，充分混勻，此時還可能會出現絮狀沉淀，不影響 DNA 的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入到吸附柱中，靜置 2min。7. 12000rpm 離心 2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。8. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前請先檢查是否己加入無水乙醇)。12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。9. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液，12000rpm 離心 l min， 棄廢液，將吸附柱放入收集管中。10. 12000rpm 離心 2min，將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續實驗如酶切、PCR 等。11. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經 65℃水浴預熱的洗脫液，室溫放置5min，12000rpm 離心 1min。12. 離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置 2min ，12000rpm 離心 2min，即可得到高質量的細菌基因組 DNA。注意事項:1. 樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的 DNA 片段較小且提取量下降。2. 若試劑盒中的溶液出現沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響提取效果。3. 如果實驗中的離心步驟出現柱子堵塞的情況，可適當延長離心時間。4. 洗脫緩沖液的體積最好不少于 50ul，體積過小會影響回收效率；洗脫液的 pH 值對洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調至此范圍)， pH 值低于 7. 0 會降低洗脫效率。DNA 產物應保存在-20℃，以防 DNA 降解。5. DNA 濃度及純度檢測：得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。回收得到的 DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA 應在 OD260處有顯著吸收峰，OD260 值為 1.0 相當于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/0D280 比值應為 1.7-1.9，如果 洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為 pH 值和離子存在會影響光吸收值，但并不 表示純度低。保存條件：室溫(15-25℃) 干燥保存，復檢期 12 個月，2-8℃保存時間更長。