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通用基因組DNA提取試劑盒產(chǎn)品貨號(hào)：26240產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T產(chǎn)品簡(jiǎn)介：本試劑盒為通用型，適合于從土壤，糞便，昆蟲(chóng)，以及其他樣本中提取基因組DNA。對(duì)細(xì)菌，真菌，昆蟲(chóng)等樣本都具有很好的裂解效果，最大限度的保留了生物DNA的多態(tài)性。使用本試劑盒提取的DNA產(chǎn)量大、完整性好，可直接用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫(kù)構(gòu)建、 Southern雜交等實(shí)驗(yàn)。產(chǎn)品組成：試劑名稱 50T 100TRNase A 1ml 1ml×2蛋白酶 K 1ml 1ml×2溶液 A 25ml 50ml溶液 B 25ml 50ml漂洗液 15ml 15ml×2洗脫液 15ml 30ml吸附柱 50 個(gè) 100 個(gè)收集管 50 個(gè) 100 個(gè)操作步驟：使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。1. 樣品的處理：1）土壤：稱取 0.1-0.3g (根據(jù)干濕)土壤，放入研缽中，倒入適量的液氮，立即研磨，重復(fù) 3 次，使土壤顆粒研成粉末，加 500ul 溶液 A，振蕩至*懸浮。2）糞便：稱取 0.1-0.3g (根據(jù)干濕) 糞便，加 500ul 溶液 A，振蕩至*懸浮。3）昆蟲(chóng)：稱取 0.1-0.3g 昆蟲(chóng)，倒入適量的液氮，立即研磨，重復(fù) 3 次，使昆蟲(chóng)研成粉末，加 500ul 溶液 A，振蕩至*懸浮。4）未知樣品，如為細(xì)未狀，可直接稱取 0.1-0.3g(根據(jù)干濕)加 500ul 溶液 A，如為塊狀，可 0.1-0.3g 用液氮研磨成粉未，再加 500ul 溶液 A，振蕩至*懸浮。2. 向懸浮液中加入 20ul 的 RNase A（10mg/ml），55℃放置 10min。3. 加入 20ul 的蛋白酶 K（10mg/ml），充分混勻，55℃水浴消化，30min。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次，12000轉(zhuǎn)離心 10min。將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中。如有沉淀，可再次離心。4. 加入 500ul 溶液 B，充分混勻。如出現(xiàn)白色沉淀，于 55℃放置 5min，沉淀即會(huì)消失，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說(shuō)明樣品消化不*，可能導(dǎo)致提取 DNA 量少及不純，還有可能導(dǎo)致上柱后堵柱子，請(qǐng)?jiān)黾酉瘯r(shí)間。5. 加入 500ul 無(wú)水乙醇，充分混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響 DNA 的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，放置 2min (分兩次加入，每次 700ul)。6. 12000rpm 離心 2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。7. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。8. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。9. 12000rpm 離心 2min，將吸附柱置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR 等。10. 將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經(jīng) 65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置5min，12000rpm 離心 2min。11. 離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置 2min，12000rpm 離心 2min，即可得到高質(zhì)量的基因組 DNA。注意事項(xiàng)：1. 由于樣品不同，最終提取的 DNA 含量和純度也有所不同，一般來(lái)說(shuō)，如果所提取 DNA 用電泳的方法檢測(cè)不到，PCR 會(huì)有結(jié)果，樣品盡可能的新鮮。否則會(huì)導(dǎo)致提取的 DNA 片段較小且提取量也下降。2. 若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響提取效果。3. 如果樣品消化不*，后面的離心步驟中可能會(huì)出現(xiàn)堵柱子的情況，可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間。4. 洗脫緩沖液的體積最好不少于 50ul，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率；洗脫液的 pH 值對(duì)洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)至此范圍)，pH 值低于 7.0 會(huì)降低洗脫效率；DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防 DNA 降解。5. DNA 濃度及純度檢測(cè)（濃度較高時(shí)）：得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān)。回收得到的 DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。DNA 應(yīng)在OD260 處有顯著吸收峰， OD260 值為 1 相當(dāng)于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/OD280 比值應(yīng)為 1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會(huì)偏低，因?yàn)?pH 值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但并不表示純度低。保存條件：室溫(15-25℃) 干燥保存，復(fù)檢期 12 個(gè)月，2-8℃保存時(shí)間更長(zhǎng)。開(kāi)封后請(qǐng)將 RNase A，蛋白酶 K 于-20℃保存。

通用基因組DNA提取試劑盒