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組織細胞RNA提取試劑盒（異硫氰酸胍提取法）產品貨號：11132產品規格：50T/100T產品簡介：RNA的種類來源比較多，提取制備的方法各異，一般有苯酚法、去污劑法和鹽酸胍法，其中常用的是苯酚法，即Trizol法提取RNA。異硫氰酸胍作為強的陰離子表面活性劑，可以有效的解離核蛋白與核酸的復合體，并對RNase產生強烈的抑制作用，保持RNA的完整性。加入氯仿等試劑并離心，上層清液用異丙醇沉淀回收總RNA。組織細胞RNA提取試劑盒(異硫氰酸胍提取法)適用于從各種組織或細胞中快速分離總RNA，既可用于小量樣品(50～100mg組織、5×106細胞)，也可用于大量樣品(>1g組織、>107細胞)。提取的總RNA質量高，可用于N orthernblot、Dot blot、polyA篩選、體外翻譯、RNase保護分析和分子克隆。本產品具有以下特點：①適用范圍廣；②操作簡單，整個過程90min內完成；③純度高；④污染少。產品組成：試劑名稱 50T 100T 保存條件試劑(A): RNA 提取液 30ml 60ml 4℃，避光試劑(B): 乙酸鈉緩沖液 3ml 6ml 室溫試劑(C): RNA 分離液 30ml 60ml 4℃，避光試劑(D): RNA 沉淀液 30ml 60ml 室溫試劑(E): RNA 洗滌液 50ml 100ml 室溫試劑(F): RNase-free ddH2O 10ml 20ml 室溫試劑(G): RNA 保存液 10ml 20ml 4℃，避光自備材料：1. 液氮、研缽或勻漿器2. 經 RNase free 處理的移液器吸頭、EP 管等耗材3. 低溫高速離心機、低溫冰箱4. 無菌 PBS 緩沖液操作步驟 (僅供參考) ：1. 實驗準備：RNA 分離液室溫放置 15min 確保兩相分開，無菌 PBS 緩沖液、RNA 提取液和 RNA 沉淀液冰上預冷。2. 樣品準備⑴ 貼壁細胞：①直接裂解：直接在培養瓶/皿中加入 RNA 提取液裂解細胞，每 10cm2面積加 1ml，用移液器吹打混勻。②胰蛋白酶消化：用無菌 PBS 洗滌細胞后，加入含有 0.05～0.25 %胰蛋白酶的 PBS 處理細胞，當細胞脫離容器壁后，加入含有血清的培養基終止反應，將細胞溶液轉移至無 RNase 的離心管中，以下參考懸浮細胞相關操作步驟。⑵ 懸浮細胞：收集(1~5)×106～107動物、植物和酵母細胞或 107細菌細胞加至 1.5ml 離心管，5000～6000g 離心5min，用無菌 PBS 重懸細胞沉淀，再次 5000～6000g 離心 5min 收集細胞沉淀，去除上清。收集細胞時一定要將溶液去除干凈，否則裂解不*，降低 RNA 收獲率。向沉淀中加入加入 0.5ml RNA 提取液，充分振蕩混勻。⑶ 組織：取新鮮動物或者植物組織或者-70℃凍存組織，50～100mg 組織在液氮中充分研磨或者加入 0.5ml RNA提取液研磨或者用勻漿器勻漿處理。樣品體積一般不超過提取液體積的 10%。研磨要迅速，以 1min 為佳。⑷ 血液：取 0.5～1ml 新鮮或凍存的血液，12000g 離心 5min，去除血漿，加入 0.5ml RNA 提取液，充分振蕩混勻。3. 核酸分離：將細胞液或勻漿液轉移至 1.5ml 離心管，加入 1/10 體積的乙酸鈉緩沖液，顛倒混勻 5~6 次。加入RNA 分離液，顛倒混勻 5~6 次后震蕩 10-20s，冰上放置 15 min,使核蛋白與核酸*分離。4. 樣品分層：12000 g 4℃離心 10～15min。RNA 在上層水相。5. 沉淀 RNA：吸取上層水相(約 0.5ml)轉移至新的 1.5ml 離心管中(不要吸取任何中間層物質,否則會有染色體DNA 污染)，加入等體積 RNA 沉淀液混勻，冰上放置 10～15 min。12000 g 4℃離心 10min，離心后管側或管底形成膠狀沉淀，棄上清。6. 洗滌 RNA：加入 1ml RNA 洗滌液輕輕洗滌沉淀，冰上放置 5～10min，7500g 4℃離心 5min，棄上清。室溫干燥 10～30min，不宜過分干燥，否則 RNA 難以溶解。7. 溶解 RNA：加入 30～50ul RNase-free dd H2O 充分溶解，-70℃長期保存或直接用于后續試驗。對于肝、胰腺、腎等組織中 RNase 含量高的樣品沉淀用 RNA 保存液溶解。注意事項：1. 樣品保存：加入 RNA 提取液混勻后，樣品可在-70℃放置 1 月；RNA 樣品可以在 70 %酒精中-70℃保存 2～4 周：如果需要長期保存，應置于超低溫冰箱中保存。2. RNA 提取液和 RNA 分離液含有腐蝕性物質，污染皮膚或眼睛后，立即用清水或生理鹽水沖洗，必要時尋求醫生的幫助。3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。有效期：12 個月有效。常溫運輸，4℃保存。