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維生素C檢測試劑盒(磷鉬酸比色法)
產品貨號:R23240
產品規格:50T/100T
產品說明:
維生素C(Vita minC)又稱L-抗壞血酸,是高等靈長類動物與其他少數生物的必需營養素,在生物體內維生素C是一種抗氧化劑,為酸性己糖衍生物,是稀醇式己糖酸內酯,保護身體免于自由基的威脅,同時也是一種輔酶,其廣泛的食物來源為各類新鮮蔬果。Vc有L-型和D-型兩種異構體,只有L-型的才具有生理功能,還原型和氧化型都有生理活性。
維生素C檢測試劑盒(磷鉬酸比色法)檢測原理是在強酸和偏磷酸的根離子存在條件下,鉬酸銨能與維生素C反應藍色化合物,在一定濃度范圍(樣品濃度控制在25~250μg/ml),吸光度值與濃度呈線性關系,以分光光度計760nm處檢測吸光度,獲得Vita minC含量。該試劑盒主要用于植物組織中的維生素C(抗壞血酸)的檢測,其優點是:1、反應迅速;2、操作簡便;3、還原糖及其他常見的還原物質對實驗沒有干擾,因此專一性好。
本試劑盒僅用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
產品組成:
試劑名稱 | 50T | 100T | 保存條件 |
試劑(A): Vita min C標準(250μg/ml) | 10ml | 20ml | 4℃,避光 |
試劑(B): 組織勻漿液(5×) | 500ml | 1000ml | 室溫 |
試劑(C): MPA | 2×1.5g | 2×3g | 室溫,避光 |
試劑(D): 酸性緩沖液 | 2×50ml | 2×100ml | 室溫 |
試劑(E): Vita min C Assay buffer | 100ml | 200ml | 4℃,避光 |
自備材料:
1、蒸餾水
2、離心管或試管
3、離心機
4、水浴鍋或恒溫箱
5、比色杯
6、分光光度計
操作步驟(僅供參考):
1、稀釋組織勻漿液:按組織勻漿液(5×):蒸餾水=1:4的比例稀釋,獲得1×組織勻漿液。
2、準備樣品:取待測材料如青菜、水果、松針等,清洗擦干,準確稱量5g,加入研磨器內,再加入少量1×組織勻漿液,研磨碎,留取上清,再次用 1×組織勻漿液研磨,最后
一并倒入50ml離心管,補充1×組織勻漿液至45ml,充分混勻,4000g離心5min,取0.5 ml上清液,加入等量蒸餾水,即為待測液。
3、配制MPA工作液:取一支1.5gMPA粉末,充分溶解于50ml酸性緩沖液中,4℃保存3~4天有效。
4、配制系列Vita min C標準:取干凈離心管或試管,按下表進行操作,依次稀釋。
加入物(ml) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
Vita min C標準(250μg/ml) | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
蒸餾水 | 0.9 | 0.8 | 0.7 | 0.6 | 0.5 | 0.4 | 0.2 | 0 |
相當于Vita min C含量(μg) | 25 | 50 | 75 | 100 | 125 | 150 | 200 | 250 |
5、Vita min C加樣:按照下表設置空白管、標準管、測定管,溶液應按照順序依次加入,并注意避免產生氣泡。如果樣品中的Vita min C含量過高,可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定,樣品的檢測最好能設置2平行管,求平均值。
加入物(ml) | 空白管 | 標準管 | 測定管 |
待測液 | - | - | 1 |
系列 Vita min C標準(1~8號) | - | 1 | - |
蒸餾水 | 1 | - | - |
1×組織勻漿液 | 2 | 2 | 2 |
MPA工作液 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
Vita min C Assay buffer | 2 | 2 | 2 |
6、Vita min C測定:立即混勻,30℃水浴15min,以空白調零,比色杯光徑1cm,以分光光度計測定760nm處系列標準管、測定管的吸光度。
計算:以系列標準Vita min C (25、50、75、100、125、150、200、250μg)為橫坐標,以對應的吸光度為縱坐標,繪制標準曲線,求得回歸方程,以測定管的吸光度代入回歸方程求得維生素C含量。
100g 樣品中維生素C含量(mg)
=( m0×V1) ×100/[(m1×V2)×1000]=( m0×V1) /[( m1×V2)×10]
式中: m0 : 根據待測樣品的吸光度值在標準曲線上查出的維生素C的質量(μg)
V1 : 待測液的總體積( ml)
m1 : 樣品質量(g)
V2 : 測定時取樣體積( ml)
1000 : μg換算成mg
注意事項:
1、上述低溫試劑避免反復凍融,以免失效或效率下降。
2、組織勻漿液(5×)久置或低溫保存,容易產生乳白色渾濁;如果白色渾濁不明顯,可以直接使用,不影響效果;如果白色渾濁較多,應棄用。
3、Vita min C Assay buffer 室溫保存時間過長或者過期會出現白色粘稠物,即不可使用,應換新的產品使用。不使用時建議4℃保存。
4、待測樣品如不能及時測定,應置于2~8℃保存,3天內穩定。
5、如果樣品濃度過高,應用蒸餾水稀釋后重測,結果乘以稀釋倍數。
保存條件:
6個月有效。4℃運輸,4℃保存。
附錄1:標準曲線制作:尚寶在室溫條件下按說明書操作,用分光光度計對系列標準進行吸光度的測定,其數值及標準曲線如下(僅供參考):
維生素C含量μg | 25 | 75 | 100 | 125 | 200 | 250 |
吸光度 | 0.072 | 0.248 | 0.318 | 0.501 | 0.693 | 0.887 |
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