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BA1119-50-谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)活性檢測試劑盒
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更新時(shí)間:2024-12-19 11:40:38

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谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)活性檢測試劑盒
谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(glutathione S-transferase,GST)是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族,主要存在于細(xì) 胞質(zhì)內(nèi)。GST是體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)的重要組成部分,主要催化各種化學(xué)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與GSH的巰基共價(jià)結(jié)合, 使親電化合物變?yōu)橛H水物質(zhì),易于從膽汁或尿液中排泄,達(dá)到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外 的目的。

谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)活性檢測試劑盒(紫外分光光度法)

注意:正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。

產(chǎn)品貨號(hào):BA1119

產(chǎn)品規(guī)格:50/48

產(chǎn)品說明:

谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(glutathione S-transferaseGST)是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族,主要存在于細(xì) 胞質(zhì)內(nèi)。GST是體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)的重要組成部分,主要催化各種化學(xué)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與GSH的巰基共價(jià)結(jié)合, 使親電化合物變?yōu)橛H水物質(zhì),易于從膽汁或尿液中排泄,達(dá)到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外 的目的。因此,GST在保護(hù)細(xì)胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。此外,因?yàn)?/span>GST具有GSH-Px 活性,亦稱為non-Se GSH-Px,具有修復(fù)氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質(zhì)等的功能。注意,GST催化的反應(yīng)減少GSH含量,但是不增加GSSG含量。

GST催化GSHCDNB結(jié)合,其結(jié)合產(chǎn)物的光吸收峰波長為340nm;通過測定340nm波長處吸光度上升速率,即可計(jì)算出GST活性。

注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測。

產(chǎn)品組成:

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品規(guī)格

保存條件

試劑一

液體50mL×1

4℃

試劑二

液體45mL×1

4℃

試劑三

粉劑×1

4℃

溶液的配制:

試劑三:臨用前加5mL蒸餾水溶解。

需自備的儀器和用品:

紫外-可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、研缽/勻漿器、1mL石英比色皿和蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

1.        組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。8000g4℃離心10min,取上清置冰上待測。

2.        細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后8000g4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。

3.        血清等液體:直接測定。

二、測定步驟

1.        分光光度計(jì)預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到340nm,蒸餾水調(diào)零。

2.        試劑二放在25℃(一般物種)或者37℃(哺乳動(dòng)物)保溫。

3.        空白管:取1mL石英比色皿,加入100μL試劑一,900μL試劑二和100μL試劑三,迅速混勻后于340nm測定10s吸光度記A125℃(一般物種)或者37℃(哺乳動(dòng)物)水浴5min后,快速取出測定吸光度記A2

4.        測定管:取1mL石英比色皿,加入100μL上清液,900μL試劑二和100μL試劑三,迅速混勻后于340nm測定10s吸光度記A325℃(一般物種)或者37℃(哺乳動(dòng)物)水浴5min后,快速取出測定吸光度記A4

三、GST計(jì)算公式:

(1)按蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分鐘催化1μmol CDNBGSH結(jié)合為一個(gè)酶活性單位。

GSTU/mg prot=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷ε×d×106×V反總÷(Cpr×V)÷T

=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷Cpr

(2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每克樣本每分鐘催化1μmol CDNBGSH結(jié)合為一個(gè)酶活性單位。

GSTU/g 質(zhì)量)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×106×V反總÷(V÷V樣總×W)÷T

=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷W

(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化1μmol CDNBGSH結(jié)合為一個(gè)酶活單位。

GSTU/104cell=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷ε×d×106×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V÷V樣總)÷T

=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷細(xì)胞數(shù)量

(4)按液體體積計(jì)算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每毫升液體每分鐘催化1μmol CDNBGSH結(jié)合為一個(gè)酶活單位。

GSTU/mL=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷ε×d×106×V反總÷V÷T

=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)]

ε:產(chǎn)物摩爾消光系數(shù),9.6×103 L/mol/cmd:比色皿光徑,1cm106:單位換算系數(shù),1mol=1×106μmolV反總:反應(yīng)體系總體積,1100μL=0.0011 LCpr:上清液蛋白質(zhì)濃度(mg/mL),需要另外測定;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,100μL=0.1mLT:反應(yīng)時(shí)間,5minW:樣本質(zhì)量,gV樣總:試劑一體積,1mL;細(xì)胞數(shù)量:以104為單位,萬。

注意事項(xiàng):

1.        樣本處理等過程均需要在冰上進(jìn)行,且須在當(dāng)日測定酶活力。

2.        細(xì)胞中GST活性測定時(shí),細(xì)胞數(shù)目須在300-500萬之間,細(xì)胞中GST的提取時(shí)可加試劑一后研磨或超聲波處理,不能用細(xì)胞裂解液處理細(xì)胞。

3.        若樣本測定吸光度大于1,建議對(duì)樣本用蒸餾水稀釋,計(jì)算時(shí)結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

4.        測定反映的溫度對(duì)測定結(jié)果有影響,請控制在25℃或者37℃(哺乳動(dòng)物)。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

1.        0.1g月季加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿,8000g4℃離心10min,取上清,稀釋50倍置冰上待測,按照測定步驟操作,測得計(jì)算ΔA測定管=A4-A3=0.647-0.587=0.06ΔA空白管=A2-A1=0.591-0.539=0.052,按樣本質(zhì)量計(jì)算得: GSTU/g質(zhì)量)=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷W×50(稀釋倍數(shù))=0.92U/g質(zhì)量。

2.        0.1g肝加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿,8000g4℃離心10min,取上清,稀釋500倍置冰上待測,按照測定步驟操作,測得計(jì)算ΔA測定管=A4-A3=0.824-0.543=0.281ΔA空白管=A2-A1=0.591-0.539=0.052,按樣本質(zhì)量計(jì)算得:GSTU/g質(zhì)量)=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷W×500(稀釋倍數(shù))=263.35U/g質(zhì)量。



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