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多酚氧化酶（PPO）檢測試劑盒（鄰苯二酚微板法）

產(chǎn)品貨號：BA1542

產(chǎn)品規(guī)格：120T

產(chǎn)品簡介：

多酚氧化酶(polyphenol oxidase，PPO)是自然界中分布極廣的一種金屬蛋白酶，普遍存在于植物、真菌、昆蟲的質(zhì)體中，甚至在土壤中腐爛的植物殘渣上都可以檢測到多酚氧化酶的活性，多酚氧化酶是一種蛋白體，在茶樹生命活動和茶葉加工過程中參與一系列由酶促活動而引起的化學(xué)變化，故又被稱為生物催化劑。該酶屬于細(xì)胞木質(zhì)素合成途徑中間的關(guān)鍵酶，研究該酶可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過程中木質(zhì)素沉積的代謝機(jī)理，為減少水果石細(xì)胞含量提高其品質(zhì)提供依據(jù)。

尚寶生物多酚氧化酶(PPO)檢測試劑盒(鄰苯二酚比色法)檢測原理是以鄰苯二酚作為底物，在酶促反應(yīng)的最適條件下采用每隔一定時間測定產(chǎn)物生成量的方法，于酶標(biāo)儀420nm處檢測吸光度，以吸光度變化所需酶量進(jìn)行計算。該試劑盒主要用于植物組織的裂解液或勻漿液、血清等樣品中內(nèi)源性的多酚氧化酶活性，尤其適用于檢測水果中多酚氧化酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1.        蒸餾水

2.        研缽或勻漿器

3.        離心管或試管

4.        低溫離心機(jī)

5.        酶標(biāo)板

6.        酶標(biāo)儀

操作步驟：

1.        準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取2g植物組織或水果中層果肉加入4ml預(yù)冷的PPO Lysis buffer 研磨或勻漿，10000g，4℃離心 15-20min，留取上清液，-20℃凍存，用于多酚氧化酶的檢測。

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，-20℃凍存，用于多酚氧化酶的檢測。

③細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如有必要用PPO Lysis buffer進(jìn)行適當(dāng)勻漿，10000g，4℃離心15-20min，取上清液，-20℃凍存，用于多酚氧化酶的檢測。

④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的多酚氧化酶，可以使用PPO Lysis buffer稀釋進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2.        PPO加樣：按照下表設(shè)置對照孔、測定孔，注意：對照孔、測定孔中為同一待測樣品，但對照孔中為提前加熱煮沸5min的樣品。溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的PPO活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定，樣品的檢測最好能設(shè)置2平行孔，求平均值。

3.        PPO 檢測：立即以酶標(biāo)儀，以對照孔為對照，測定420nm處對照孔的吸光度(A測定0 )；1min后立即測定 420nm 處測定孔的吸光度(A測定1)。

計算：

PPO活性單位的定義：在該實(shí)驗條件下，每1min吸光度變化0.01所需酶量為一個活性單位。

組織樣本PPO(U)={(A_測定1 -A_測定0 )×V _T }/(W×V _S ×0.01×t)

式中：A_測定 1 =反應(yīng)1min后測定孔的吸光度

A_測定 0 =加入PPO Assay buffer立即測定的測定孔吸光度

W=組織樣本的重量(g)

V_T =提取酶液的總體積(ml)

V_S =測定時所用酶液體積(ml)

液體樣本PPO(U)=(A_測定1 -A_測定0 )/(0.01×t)

式中：A_測定1 =反應(yīng)1min后測定孔的吸光度

A_測定0 =加入PPO Assay buffer立即測定的測定孔吸光度

t=反應(yīng)時間

注意事項：

1.        待測樣品中不能含有酶抑制劑，同時需避免反復(fù)凍融。

2.        PPO酶液提取時，注意低溫操作，防止酶活性。4℃保存2-3天，亦可-20℃保存。

3.        以煮沸的酶液為對照時，酶要充分失活。

4.        如果沒有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計測定；每次檢測指標(biāo)不宜過多，否則操作時間不一，有可能導(dǎo)致樣本間的差異。

有效期：6個月有效。