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甘油三酯（TG）含量檢測(cè)試劑盒（微量法）

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1110

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

TG是長(zhǎng)鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不僅是細(xì)胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。 測(cè)定原理： 用異丙醇抽提取TG，KOH皂化TG后水解生成甘油及脂肪酸，過(guò)碘酸氧化甘油生成甲醛，在氯離子存在下甲醛與乙酰丙酮縮合生成黃色物質(zhì)，在420 nm有特征吸收峰，其顏色的深淺與TG含量成正比。

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：自備，取玻璃空瓶，加入60mL正庚烷，60mL異丙醇，蓋緊后混勻，4℃保存。

試劑二：液體3mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：液體10mL×1瓶，4℃保存。

試劑四：液體3mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑五：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑六：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1瓶，臨用前加5mL試劑一，即1mg/mL甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃保存。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量比色皿/96孔板、雙蒸水和125mL玻璃空瓶。

操作步驟：

一、TG的提取：

1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清待測(cè)。

2、細(xì)胞、細(xì)菌：先收集400-500萬(wàn)細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，加1mL試劑一，超聲波破碎1min（強(qiáng)度20％，超聲2s，停1s），8000g， 4℃離心10min，取上清待測(cè)。

3、血清（漿）等液體樣品：直接測(cè)定。

二、測(cè)定操作：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到420 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 水浴鍋預(yù)熱到65℃。

加試劑一后充分混勻，再加試劑二，劇烈振蕩30s，靜置，待分層后取上層溶液15µL，置于新的EP管中。

3．甘油三酯含量測(cè)定：

轉(zhuǎn)移至微量比色皿/96孔板測(cè)定420nm處吸光度，記為A空，A標(biāo)和A測(cè)。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

三、計(jì)算公式：

1. 血清（漿）中甘油三酯含量：

TG含量（mg/dL）=C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測(cè)－A空）÷（A標(biāo)－A空）

=（A測(cè)－A空）÷（A標(biāo)－A空）

C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，1mg/mL；100：?jiǎn)挝粨Q算系數(shù)，1dL=100 mL。

2. 組織中甘油三酯含量：

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

TG含量（mg/mg prot）= C標(biāo)準(zhǔn)品×V×（A測(cè)－A空）÷（A標(biāo)－A空）÷（Cpr ×V）

=（A測(cè)－A空）÷（A標(biāo)－A空）÷ Cpr

(2)按樣本鮮重計(jì)算

TG含量（mg/g 鮮重）=C標(biāo)準(zhǔn)品×V×（A測(cè)－A空）÷（A標(biāo)－A空）÷W

=（A測(cè)－A空）÷（A標(biāo)－A空）÷ W

C標(biāo)準(zhǔn)品：1mg/mL ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g ;V：加入試劑一的體積，1mL。

3. 細(xì)胞、細(xì)菌中甘油三酯含量：

TG含量（mg/10⁴ cell）=C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測(cè)－A空）÷（A標(biāo)－A空）÷細(xì)菌或細(xì)胞密度

=（A測(cè)－A空）÷（A標(biāo)－A空）÷細(xì)菌或細(xì)胞密度

C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，1mg/mL；細(xì)菌或細(xì)胞密度：10⁴ cell/mL

注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒中有易揮發(fā)性物質(zhì)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需佩戴手套和口罩，試劑瓶蓋打開(kāi)后應(yīng)該及時(shí)蓋緊。

2. 加試劑二后需劇烈震蕩，使待測(cè)液中甘油三酯得到充分提取。

3. 低檢出限為100µ mol/L。