在養(yǎng)細(xì)胞的過程中，實驗室污染仍是普遍存在的問題。在這個過程中，使用的試劑、耗材、環(huán)境、操作等都有可能造成污染，如支原體污染、細(xì)菌污染等[1]。污染會影響細(xì)胞的生長和形態(tài)，甚至導(dǎo)致細(xì)胞功能、性質(zhì)發(fā)生改變，進(jìn)而影響實驗研究的準(zhǔn)確性。
因此，對實驗室污染進(jìn)行預(yù)防、排查與清除，是至關(guān)重要的。本期細(xì)胞學(xué)堂為您整理了一份實驗室污染最-全應(yīng)對攻略，幫助您快速上手清除污染。
01
污染的預(yù)防
嚴(yán)格執(zhí)行細(xì)胞實驗室規(guī)章制度
不斷完善無菌實驗室規(guī)章制度，加強無菌實驗室的管理。外來進(jìn)修人員、實習(xí)學(xué)生進(jìn)入實驗室前要進(jìn)行培訓(xùn)和教育，掌握一定的基本理論、實驗技能、操作規(guī)程后，在帶教老師的指導(dǎo)下方可進(jìn)行實驗操作。
培養(yǎng)箱、無菌室、凈化臺定期消毒
工作臺實驗前紫外燈消毒30 min，實驗后用75%的酒精擦拭臺面；實驗廢棄物高壓蒸汽滅菌后，丟棄至醫(yī)療廢物桶；無菌室以10 mL/m2的甲醛（40%），5 g/m2濃度的高錳酸鉀定期封閉消毒[2,3]，若采用甲醛熏蒸，甲醛氣體必須分布到房間的每個角落。也可以使用普諾賽細(xì)胞房安全衛(wèi)士、水浴鍋安全衛(wèi)士進(jìn)行定期清理。
杜絕感染源的產(chǎn)生
實驗人員進(jìn)入實驗室必須穿隔離衣，盡量減少頻繁出入細(xì)胞實驗室，在操作過程中動作輕柔，避免微生物氣溶膠的產(chǎn)生。一旦發(fā)現(xiàn)污染，應(yīng)立即排查原因，采取有效可靠的方法清除污染源，盡可能的防止大面積污染。
控制實驗室濕度與溫度
細(xì)菌、真菌等廣泛存在于自然界中，屬于條件致病菌，有很強的繁殖能力，溫暖潮濕的環(huán)境，會大量滋生。因此，必須控制實驗室的溫度和濕度，保持室內(nèi)干燥與清潔，阻止細(xì)菌、真菌等繁殖，切斷其傳播途徑。
02
污染的排查
實驗室常見污染有細(xì)菌、真菌、支原體、黑膠蟲等。在不確定是否污染的情況下，可進(jìn)行排查，初步確定是否污染及污染的類型。
1
采樣
對懷疑污染的地方，比如操作臺、培養(yǎng)箱、顯微鏡等，用醫(yī)用滅菌級棉簽蘸取采樣液（生理鹽水）進(jìn)行采樣；對可疑培養(yǎng)試劑，吸取少量試劑進(jìn)行取樣；對懷疑有污染的細(xì)胞，吸取培養(yǎng)液上清進(jìn)行取樣。
2
培養(yǎng)
將采集的樣本分別置于瓊脂培養(yǎng)基與DMEM培養(yǎng)基中，瓊脂培養(yǎng)基放于生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h，DMEM培養(yǎng)基置于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d。
3
檢測
觀察瓊脂培養(yǎng)基是否出現(xiàn)細(xì)菌或者真菌菌落；可選擇使用PCR法、顯色法或熒光染色法檢測是否有支原體污染；對于“黑膠蟲"污染，目前沒有明確鑒定方法。
03
污染后處理
環(huán)境中發(fā)現(xiàn)污染
使用75%的酒精擦拭操作臺/儀器設(shè)備，進(jìn)行消毒。甲醛（40%）10 mL/m2，高錳酸鉀5 g/m2，熏蒸細(xì)胞培養(yǎng)室。同時也可使用普諾賽細(xì)胞房安全衛(wèi)士、水浴鍋安全衛(wèi)士進(jìn)行殺菌消毒。
細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)污染
①
輕度細(xì)菌污染可用10×雙抗清洗處理，重度細(xì)菌污染建議丟棄后消殺。
②
真菌污染可以嘗試使用兩性霉素B進(jìn)行處理，抑制真菌生長。真菌較難根-除，不建議保留，建議丟棄后消殺。
③
支原體、“黑膠蟲"污染后若細(xì)胞狀態(tài)尚可，可添加支原體清除試劑/“黑膠蟲"清除試劑培養(yǎng)2~3代觀察細(xì)胞狀態(tài)；若細(xì)胞污染后狀態(tài)很差，建議丟棄后消殺。
●參考文獻(xiàn)●
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