這篇文章Kaustubh Kishor Jadhav撰寫(xiě)的，今天接著把續(xù)集寫(xiě)完，劃重點(diǎn)，續(xù)集真的很重要，因?yàn)槎际菨M(mǎn)滿(mǎn)告訴您怎么對(duì)付和清除支原體的干貨。

避免支原體感染的最好和最重要的方法是為實(shí)驗(yàn)室工作人員提供適當(dāng)?shù)呐嘤?xùn)和指導(dǎo)。這可以通過(guò)培訓(xùn)合格的員工進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，從而消除污染的原因之一。如果可能的話(huà)，應(yīng)該為細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞系的維持提供一個(gè)單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)室。為實(shí)驗(yàn)室提供這樣的環(huán)境不僅可以減少支原體，而且可以避免其他細(xì)菌和真菌污染。

合適的個(gè)人防護(hù)用品很重要

由于人類(lèi)是污染的主要來(lái)源，預(yù)防步驟從你開(kāi)始。如果你足夠小心地為工作提供一個(gè)無(wú)菌的環(huán)境，它很快就會(huì)在你意識(shí)到之前成為一種習(xí)慣。這里有一些事情要做： 

1.在處理細(xì)胞系時(shí)，穿上干凈的實(shí)驗(yàn)服和面罩。

2.避免與其他實(shí)驗(yàn)室成員討論，在實(shí)驗(yàn)室打噴嚏或咳嗽。人類(lèi)口腔中含有多種支原體，當(dāng)你說(shuō)話(huà)、大笑、打噴嚏或咳嗽時(shí)，這些支原體會(huì)進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)。

3.工作時(shí)戴手套，使用后丟棄。在沒(méi)有手套或口罩的情況下工作時(shí)，人與人接觸會(huì)傳播污染。一定要定期更換手套和口罩，而不是把它們放在實(shí)驗(yàn)服的口袋里。

4.為實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備單獨(dú)的鞋子，以避免帶入環(huán)境污染物。

細(xì)胞系和試劑

5.使用前檢查你的細(xì)胞株有無(wú)支原體污染。

6.確保用于繼代培養(yǎng)的血清中沒(méi)有污染。避免使用存放時(shí)間較長(zhǎng)的過(guò)期產(chǎn)品或試劑。

7.盡可能使用新鮮培養(yǎng)基和密封緊密的試劑耗材。

8.使用一次性移液管以避免交叉污染。

9.在工作之前和工作期間，確保將所有必需的設(shè)備和試劑放在層流氣流中。

10.在使用細(xì)胞系進(jìn)行化驗(yàn)或分析之前，進(jìn)行支原體污染的常規(guī)檢查。

11.使用0.1微米的過(guò)濾器，因?yàn)樗麄兪且粋€(gè)更好的方式避免支原體，而不是使用0.2微米的過(guò)濾器，為媒體過(guò)濾。雖然不能100分之100保證這個(gè)過(guò)程可以避免污染，但這是一個(gè)很好的預(yù)防措施。

12.準(zhǔn)備少量用于實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)基，防止其他培養(yǎng)基受到污染。

13.避免細(xì)胞培養(yǎng)物長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中，并確保在將其放入培養(yǎng)箱之前擰緊瓶蓋。這也將解決通過(guò)氣溶膠污染的問(wèn)題。

14.在不使用抗生素的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，因?yàn)槭褂每股貢?huì)使支原體對(duì)抗生素產(chǎn)生耐藥性。抗生素只能用于去除支原體，不能用于防止支原體生長(zhǎng)。此外，長(zhǎng)時(shí)間使用某種抗生素會(huì)導(dǎo)致除支原體外的其他細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性。

15.即使冷凍保存細(xì)胞的存活率隨著每一次繼代培養(yǎng)而降低，也要始終以冷凍保存的小瓶的形式保存細(xì)胞系。

定期對(duì)層流設(shè)備和實(shí)驗(yàn)室設(shè)備進(jìn)行熏蒸

用于維持細(xì)胞系的CO2培養(yǎng)箱不得過(guò)度擁擠（填充量不得超過(guò)其容量的60%），否則會(huì)導(dǎo)致支原體從一個(gè)細(xì)胞系感染到另一個(gè)細(xì)胞系。

多個(gè)細(xì)胞系不應(yīng)存放在一個(gè)培養(yǎng)箱中，因?yàn)樗鼤?huì)增加交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。

應(yīng)定期清潔CO2培養(yǎng)箱，避免任何形式的潮濕。為保持濕度而提供的蒸餾水應(yīng)該定期更換，因?yàn)橹гw、細(xì)菌和真菌可以在這些容器中居住。

立即清理所有溢出的培養(yǎng)基和試劑。

水浴、液氮容器、試劑瓶和其他傳染源必須定期清潔，并定期檢查是否有污染。

那么你發(fā)現(xiàn)了支原體污染，接下來(lái)怎么辦？最（嘬）好的方法是丟棄被感染的細(xì)胞培養(yǎng)瓶。在文化不可替代或非常昂貴的情況下，有一些方法可以拯救文化。

消除是一個(gè)非常耗時(shí)的過(guò)程，并增加了對(duì)其他健康細(xì)胞系的二次污染風(fēng)險(xiǎn)。支原體清除劑（MRA）是喹諾酮類(lèi)抗生素的衍生物，是廣譜抗生素。這些試劑可以用來(lái)清洗細(xì)胞培養(yǎng)物。根據(jù)感染的嚴(yán)重程度，治療可能需要幾周到幾個(gè)月。漿細(xì)胞素是一種廣泛應(yīng)用的藥物，可以清除培養(yǎng)基中存在的大多數(shù)支原體。此外，諸如BM-Cyclin、氟喹諾酮類(lèi)環(huán)丙沙星、環(huán)丙沙星、zagam、baytril、四環(huán)素等藥物可用于從感染培養(yǎng)物中去除支原體。

MRAs無(wú)毒，能有效去除大部分支原體污染，使用方便，對(duì)多種支原體有效。這些方法不能保證*去除支原體，但可以去除大部分支原體污染，是最后的選擇。考慮到這種治療的持續(xù)時(shí)間會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)和活力，因此存在一些缺點(diǎn)。如果支原體對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)造成了永（詠）久性的損害，那是不可修復(fù)的。一些細(xì)胞可能會(huì)由于較長(zhǎng)的潛伏期而死亡，并影響細(xì)胞的總活力。