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原位裂解細(xì)胞的CAT分析法

時間:2021/12/15閱讀:1220
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材料與儀器

轉(zhuǎn)染細(xì)胞
Triton裂解液
培養(yǎng)皿 培養(yǎng)箱

步驟

1.  60 mm 培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染了CAT表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞,用2 ml PBS洗1次。每培養(yǎng)皿加入2 ml 低滲緩沖液,在室溫下溫育2~5 min。

2.  吸去低滲緩沖液,加入400 μl Triton裂解液。用橡膠刮子將細(xì)胞刮離培養(yǎng)血,用1 000 μl 移液器將裂解物移入1.5  ml 微量離心管中。

3.  微量離心1 min 除去細(xì)胞核,不可溶性蛋白。將上清轉(zhuǎn)入一個干凈的微量離心管中, 進行CAT活性分析。

 


同實驗其他方法

CAT活性的層析分析法

1.  100 mm 培養(yǎng)皿中的轉(zhuǎn)染了CAT表達(dá)質(zhì)粒的貼壁細(xì)胞,用PBS洗兩次,每次5 ml每培養(yǎng)皿加入1 ml TEN溶液。將細(xì)胞置于冰浴5 min。   2.  用橡膠

CAT活性的相-抽提分析法

一、來源于哺乳動物細(xì)胞 1.  按“CAT活性的層析分析法"中的步驟1~5的凍融法,制備哺乳動物細(xì)胞提取物。如果用胰蛋白酶消化或制細(xì)胞方法來收集細(xì)胞,則將原位裂解法的步驟1至4用以下的步驟2

人生長激素的放射免疫分析法

1.  取轉(zhuǎn)染了hGH表達(dá)質(zhì)粒的哺乳動物細(xì)胞的培養(yǎng)液100~500 μl。 2.  加100 μl 培養(yǎng)液或標(biāo)準(zhǔn)品至12 mm×75 mm 圓底試管中。加入100 μl 125I-

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安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶,提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴增和生產(chǎn),包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等,為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù);提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品;提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。


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