1. 室溫下，2 000~4 000 g 離心5 min，將植物原生質(zhì)體細(xì)胞收集于1.5 ml 的微量離心管中，棄去上清。

2. 往細(xì)胞沉淀加50 μl 低滲緩沖液，在旋渦混合器上劇烈振蕩，將離心管置于-70℃ 15 min以上，或置于干冰/乙醇浴中5 min 以凍結(jié)樣品。融解樣品，在室溫下13 000 g 離心2 min，將上清移入一個干凈管中。

3. 對于分析50 μl 細(xì)胞提取液，配置如下CAT分析混合液

20 μl 0.01 μCi/μl ［3H］氯霉素
5 μl 5 mg/ml 丁酰輔(酶)A
5 μl 2 mol/l Tris·Cl，pH8.0
20 μl H2O

4. 對每組分析，將50 μl CAT分析混合液加入50 μl 細(xì)胞提取液中。37℃溫育30~90 min。

5. 用200 μl 2：1的TMPD/二甲苯劇烈報(bào)蕩提取乙酰化的氯霉素，離心并移出上層液相至一只閃爍瓶中。

6. 樣品中加3~5 ml 閃爍液，計(jì)數(shù)測定CAT的活性。

同實(shí)驗(yàn)其他方法

CAT活性的層析分析法

1. 100 mm 培養(yǎng)皿中的轉(zhuǎn)染了CAT表達(dá)質(zhì)粒的貼壁細(xì)胞，用PBS洗兩次，每次5 ml每培養(yǎng)皿加入1 ml TEN溶液。將細(xì)胞置于冰浴5 min。 2. 用橡膠

原位裂解細(xì)胞的CAT分析法

1. 60 mm 培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染了CAT表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞，用2 ml PBS洗1次。每培養(yǎng)皿加入2 ml 低滲緩沖液，在室溫下溫育2~5 min。 2. 吸去低滲緩沖液，加入400 μl T

人生長激素的放射免疫分析法

1. 取轉(zhuǎn)染了hGH表達(dá)質(zhì)粒的哺乳動物細(xì)胞的培養(yǎng)液100~500 μl。 2. 加100 μl 培養(yǎng)液或標(biāo)準(zhǔn)品至12 mm×75 mm 圓底試管中。加入100 μl 125I-

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎關(guān)注安培生物科技有限公司了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

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安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。

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CAT活性的相-抽提分析法

材料與儀器

步驟

同實(shí)驗(yàn)其他方法

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