當前位置:深圳市安培生物科技有限公司>>技術文章>>夏天到了,您做好預防細胞污染了嗎?
注意事項:
夏天到了,天氣炎熱,空氣中的溫度濕度都在上升,這時最易滋生細菌等微生物,導致細胞培養過程會沒有那么的順利,總是被污染,而且微生物繁殖的速度非常快。今天我們就來說道說道細胞污染應該怎么預防、處理。
目前細胞污染大致可分為:細菌、真菌、支原體、黑膠蟲、病毒等污染。那么想要解決問題,我們就需要知道細胞是遭受了何種污染,才可對癥下藥。接下來我們將帶領大家逐步分析這些污染。
細 菌
細菌污染時,培養基在短時間內變成黃色或白色渾濁,有時稍加震蕩,便會有很多混濁物漂起。有些狀況下培養基顏色改變不明顯但細胞形態會變異(出現多角,多核狀況)、細胞不附著。
細菌屬于原核生物,比細胞小很多,在顯微鏡下或成黑色細沙狀,或背景有大量黑點。可能造成細胞增殖緩慢或形態上的改變(多角、多核等),細胞質中產生空泡、細胞不附著。
如遇細菌污染,我們可以如何處理呢?
合理使用相應抗生素可殺滅細菌:
抗生素 | 作用對象 | 使用比例 | 儲存條件 |
卡那霉素溶液 | 細菌(如G+、G-)、支原體 | 稀釋:1:100 | -20oC |
硫酸慶大霉素溶液 | 細菌(如G+、G-)、支原體 | 稀釋: 1:1000 | AMB室溫(15-30℃) |
青鏈雙抗 | 細菌(如G+、G-) | 稀釋: 1:100 | -20oC |
青鏈雙抗,10濃縮液 | 細菌(如G+、G-) | 稀釋: 1:1000 | -20oC |
青鏈霉素,制霉菌素三抗 | 細菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌) | 稀釋: 1:100 | -20oC |
青鏈霉素,兩性霉素素B三抗 | 細菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌) | 稀釋: 1:100 | -20oC |
青鏈霉素,新霉素三抗 | 細菌(如G+、G-) | 稀釋: 1:100 | -20oC |
真 菌
真菌指的是類似棉絮狀的漂浮物,真菌是真核生物,比細胞大。在顯微鏡下可觀察到菌絲體,真菌有菌絲體,呈絲狀、管狀、樹狀、串珠狀。真菌一般呈菌落聚集生長。污染早期不會使培養基變黃。
細胞被真菌污染后,仍可生長,長時間細胞的活力狀態會變差,梅雨季時的污染率會提高。
真菌的種類也比較多:酵母菌、念珠菌、霉菌(青霉菌、根霉菌、曲霉)、蕈菌等。這些菌類都有各自的特點,很容易區分。
酵母菌:成串的卵狀物,體積為細胞的1/5~1/10倍,可由出芽生殖時的一大一小連體結構識別,污染嚴重時會造成培養基pH值改變,不易去除。
念珠菌:卵圓狀,在細胞周邊生長。
霉菌:霉菌在我們的生活中無處不在,它比較青睞于溫暖潮濕的環境,一有合適的環境就會大量的繁殖,有綠色,毛茸茸的青霉菌,還有像樹根一樣根霉菌。
如果發現真菌污染,我們如何進行處理呢?
合理使用相對應的抗生素,可有效殺滅真菌污染:
抗生素 | 作用對象 | 使用比例 | 儲存條件 |
兩性霉素素B | 真菌(如:酵母菌、霉菌) | 稀釋:1:1000 ~ 1: 10,000 | -20oC |
制霉菌素 | 真菌(如:酵母菌、霉菌) | 稀釋:1:100 ~ 1:1000 | -20oC |
青鏈霉素,制霉菌素三抗 | 細菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌) | 稀釋: 1:100 | -20oC |
青鏈霉素,兩性霉素素B三抗 | 細菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌) | 稀釋: 1:100 | -20oC |
支 原 體
支原體常來源于實驗人員(支原體常見于人體皮膚、呼吸道、生殖道和消化道)、動物源血清及胰酶、消毒不*的器具,體積只有0.15~0.3μm,所以能通過一般培養基0.2μm過濾膜進入培養基體系,培養基不會變黃,所以污染時不容易用常規方法發現,光學顯微鏡難以辨識。
支原體革蘭染色為陰性,大部分支原體繁殖速度比細菌慢,對青霉素類的抗生素不敏感。污染不但會緩慢的改變細胞形態(拉絲、鋪展)、增殖、基因表達、蛋白合成及代謝反應,它攜帶的DNA/RNA與蛋白更可能造成QPCR或Western Blot結果偏差。
方案一:BIOMYC-1(03-036)和BIOMYC-2(03-037)的使用方法:
加1ml的 BIOMYC-1 溶液至100ml培養基中,保持受污染的細胞在混合液中培養4天,期間可用含 BIOMYC-1 的新培養基對細胞進行傳代;
4天后,加1ml BIOMYC-2 溶液至100ml的新培養基中,并維持培養3天,期間可進行傳代。
以上是一個處理周期,必要時可繼續 2-3 次處理周期。
每過一個周期,細胞需要做支原體污染檢測,以確認效果,從而適當減少實驗過程。
方案二:BIOMYC-3(03-038)的使用方法:
加1ml BIOMYC-3至100ml培養基中;
持續培養14天,期間可進行傳代;
以上是一個處理周期,必要時可繼續 2-3 次處理周期。
每過一個周期,細胞需要做支原體污染檢測,以確認效果,從而適當減少實驗過程。
提 示
支原體殺除試劑對實驗幾乎沒有影響,可進行細胞實驗;如果客戶使用其中一種方案,不能清除支原體,說明該支原體可能在另一種方案的抑菌譜內;最佳方案是先用方案一處理一周期,再用方案二處理一周期,然后做支原體檢測。
黑 膠 蟲
目前科學界對黑膠蟲并無定論,認為是不明沉淀現象或多種未知生物污染現象的通稱。
黑膠蟲不是一個新的物種,是大家對顯微鏡下會活躍游動或原代打轉、顫動的未經測序鑒定的微生物的別稱。因為多呈黑點的游動,被大家稱為“黑膠蟲"。實際上,它不是蟲子,經過我們對多個客戶提供的黑膠蟲樣本測序,發現實際上它是各種細菌。大多數細菌都有鞭毛,這也就不難理解,它為啥會像蟲子一樣游動或原地打轉,顫動。
在高倍率顯微鏡頭下,可觀察到各式形狀的小黑點(卵圓狀、球狀、桿狀等)、活躍的布朗運動及明顯游動現象。
復蘇或傳代時往往會出現黑膠蟲污染,并且與細胞呈現此消彼長的現象,部分黑膠蟲具有細胞毒性,可引起細胞生長遲緩或裂解凋亡,培養基不渾濁。
方案一:BIOMYC-1(03-036)和BIOMYC-2(03-037)和三抗(03-033)的使用方法:
加1ml的 BIOMYC-1 和三抗溶液至 100ml培養基中,保持受污染的細胞在混合液中培養 4 天。期間需加入含 BIOMYC-1和三抗溶液的少許的新培養基;
4天后,加1ml BIOMYC-2和三抗溶液至 100ml 的新培養基中,并維持培養 3 天;
以上是一個處理周期,必要時可繼續 2-3 次如上處理循環。
方案二:BIOMYC-3(03-038)和三抗(03-033)的使用方法:
加1ml BIOMYC-3和三抗溶液至100ml培養基中;
持續培養14天,期間每2-3天更換一次培養基;
以上是一個處理周期,必要時可繼續 2-3 次如上處理循環。
在處理過程中,細胞需要做支原體污染檢測,以確認效果,從而適當減少實驗過程。
以上污染與實驗室環境,溫度濕度等都有較大的關系,因此細胞房我們也需要提前做好預防。
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