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0.25%胰蛋白酶和EDTA混合液
平滑肌培養(yǎng)液
Petri培養(yǎng)皿 手術刀和10號手術刀片 解剖剪 組織鑷
1. 從小牛取胸主動脈。
2. 將胸主動脈浸入 Hanks 液。
3. 分離細胞之前將動脈放在冰上。
4. 將動脈放入 150 mm × 25 mm Petri 培養(yǎng)皿。
5. 用解剖剪沿長軸剪開動脈。
6. 用手術刀片輕刮動脈內腔面，以除去內皮細胞。
7. 將動脈的中膜與內膜和外膜分離。
8. 將中膜切成約 1 cm2 大小的組織塊。
9. 將中膜組織塊放入 60 mm × 15 mm Petri 培養(yǎng)皿，內膜側朝下。
10. 讓組織塊貼壁約 10 min。
11. 直接在組織塊上注 1 ml SMCM（平滑肌培養(yǎng)液（smooth muscle cell medium，SMCM）：DMEM 添加 20 % FBS，100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 鏈霉素）。
12. 將組織塊放入濕潤的培養(yǎng)箱，在 37°C 和 10% CO2 條件下孵育。
13. 第 2 天加入 5 ml SMCM，注意勿讓組織塊去附著。
14. 將組織塊繼續(xù)孵育 10 d。此后，平滑肌細胞從組織塊遷移出來，并變?yōu)閱螌印?br style="border: 0px solid currentcolor; box-sizing: border-box; --tw-shadow:0 0 #0000; max-width: 100%; background: none !important; font-size: 0.32rem !important; line-height: 0.48rem !important; margin: 0px !important;"/>
15. 細胞生長接近形成單層時，用 0.25 % 胰蛋白酶和 EDTA 混合液傳代。
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