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從有限的細胞中提取 RNA

時間:2023/4/21閱讀:882
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材料與儀器

LCM 帽子
乙醇 糖原 RNA 提取試劑盒 超純水
移液器

步驟

一、材料

1. 緩沖液、試劑和溶液

75% 乙醇 (超純水配制)

糖原,5 mg/ml(Ambion,Austin,TX)

StratageneRNA 提取試劑盒(200345,StratageneCloningSystems,LaJolla,CA),

包括變性溶液、飽和酚 (存于 4°C)、β-巰基乙醇 (存于 4°C)、氯仿:異戊醇、

2mol/L 乙酸鈉、異丙醇。或者使用 PicoPureRNA 分離試劑盒(KIT0202,Arcturus,

MountainView,CA)

DEPC 處理的超純水 (BiotecxLaboratories,Houston,TX)(4°C 儲存)

2. 特殊設備

移液器

無 RNA 酶的 1.5 ml 管子

3. 細胞和組織

來自方案 3 的 LCM 帽子

二、方法

1. 加入 200ul 變性溶液和 1.6ulβ-巰基乙醇到 0.5 ml 管子中。

2. 將 LCM 帽子插入管子,渦旋 5s。

3. 倒置管子孵育 5 min。

4. 移去 LCM 帽子。這一步獲得的樣品可以在-80°C 保存 6 個月。

5. 將溶液轉移到 1.5 ml 管子中。

6. 加入 2ul2mol/L 的乙酸鈉,溫和混勻。

7. 加入 220ul 水飽和的酚(底層),溫和混勻。

8. 加入 60ul 氯仿:異戊醇,劇烈晃動。

9. 放于冰上 15 min。

10.14000r/min4°C 離心 30 min。

11. 吸上層溶液到新管子中。

12. 加入 2ul 糖原(最終濃度 10~150ug/ml)。

13. 加入 200ul 冷異丙醇。

14.-80°C 過夜。


深圳安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力、壹流的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業。總部設在廣東,服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技公司,旨在為生命科學的發展提供壹流的產品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經科學等領域的產品供應線,在各個領域內向用戶提供世界前沿水平和質量穩定的產品,安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等優質客戶提供優質的產品、技術支持與服務。


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