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核提取物的制備方法2021/11/24
材料與儀器轉瓶或單層培養的哺乳動物細胞（如HeLa細胞）PBS低滲緩沖液高鹽緩沖液含1.2molLKCl透析緩沖液液氮貝克曼JS4.2轉子或相當的轉子50mL圓錐形刻度聚丙烯離心管（對較小體積的提取物...
如何做非肌肉肌球蛋白的層析純化？2021/11/24
材料與儀器非肌肉肌球蛋白勻漿緩沖液肌動蛋白聚合緩沖液凝膠過濾羥基磷灰石緩沖液GFHT緩沖液大容量轉頭步驟高速離心和DEAE層析1.用不含除了PMSF以外的蛋白水解抑制劑的勻漿緩沖液平衡DEAE纖維素，...
細胞勻漿的操作2021/11/24
材料與儀器細胞緩沖鹽溶液二異丙基氟瞬酸勻漿緩沖液相差顯微鏡步驟1.準備下面的貯液和材料。等滲的緩沖鹽溶液（例如PBS，150mmol/LNaCl；10mmol/LNaPO4，pH7.2)二異丙基氟瞬酸...
從培養的細胞中純化總RNA的方法2021/11/24
材料與儀器細胞RNA提取緩沖液變性液水飽和酚培養皿Falcon2063管步驟1.取1個細胞已長滿的100ml培養皿，吸出培養液，加2mlRNA提取緩沖液，用橡膠刮棒刮下細胞。RNA提取緩沖液：變性液，...
純化質粒（堿裂解法）2021/11/18
材料與儀器大腸桿菌LB葡萄糖緩沖液乙酸鉀離心管步驟1.單個大腸桿菌克隆接種到2ml含適當抗生素的LB中。37℃劇烈振蕩孵育5~8小時?；蛘呖梢耘囵B過夜使飽和。2.倒1.5ml培養液到已作標記的微量離心...
基因組DNA的快速純化方法2021/11/18
材料與儀器尾部緩沖液蛋白酶K離心管玻璃棒步驟第1天1.大約1.5cm長的尾部活檢樣品放在一個1.5ml盛有0.7ml尾部緩沖液的小離心管中，加35ul10mg/ml蛋白酶K，在55℃振搖溫育過夜。尾部...
如何從哺乳動物細胞或組織分離DNA2021/11/18
材料與儀器細胞TBS抽提緩沖液離心管步驟1.根據樣品類型，從下列方法中選一個作為步驟1進行操作。(1)細胞樣品①單層培養的細胞以用冰預冷的TBS將單層細胞洗滌2次，用刮棒把細胞刮入約0.5ml的TBS...
如何從組織中分離制備細胞核基質/中間纖維支架結構？2021/11/18
材料與儀器新鮮組織NaCl緩沖液細胞骨架緩沖液Teflon研杵Doume勻漿器步驟1.在4℃將新鮮組織切成1mm3左右的小塊。在4℃，用Teflon研杵和Doume勻漿器在含0.5%TritronX-...
如何從培養細胞中制備細胞核基質/中間纖維骨架結構？2021/11/18
材料與儀器細胞TritronX-100抽提緩沖液電子顯微鏡步驟1.在4℃用PBS洗細胞一次。2.在4℃用含0.5%TritronX-100的細胞骨架緩沖液抽提細胞3到5分鐘。直到消化步驟，每107個細...
如何從肝臟組織中制備細胞核？2021/11/17
材料與儀器大鼠裂解緩沖液濃蔗糖溶液超速離心機組織研磨器步驟1.配制裂解緩沖液和濃蔗糖溶液（PMSF在使用前添加），冰上放置。裂解緩沖液：0.25mol/L蔗糖網織紅細胞標準緩沖液（RSB）0.25mo...
如何從擬南芥菜中分離葉綠體？2021/11/17
材料與儀器葉組織研磨懸浮緩沖液燒杯Polytron勻漿器步驟1.組織勻漿(1)收集10g葉組織，放進一400ml的燒杯中。(2)加入200ml冰冷的研磨懸浮緩沖液。在4℃的房間中，用Polytron勻...
葉綠體分離的操作方法2021/11/17
材料與儀器葉子組織PBF-Percoll溶液山梨醇BSAHEPES-KOHEDTA聚碳酸酯離心管步驟1.制備Percoll梯度(1)兩個50ml的聚碳酸酯離心管中分別加入25ml50%的PBF-Per...
從組織培養細胞中制備粗微體的方法2021/11/17
材料與儀器細胞環己酰亞胺勻漿緩沖液培養皿步驟1.培養基中加入環己酰亞胺（溶于蒸餾水，貯存液濃度0.1mol/L，-20℃保存。如果不溶，試著加熱到40℃以幫助溶解）（終濃度10μmol/L)，37℃保...
從狗的胰臟中制備粗微體2021/11/17
材料與儀器胰臟HM緩沖液蔗糖-緩沖液三乙基氨基乙酸緩沖液步驟1.從動物身體切下胰臟，立即用大約50ml冷HM緩沖液沖洗，放置于干凈的紙巾上，去除結締組織：勻漿介質（HM）0.25mol/L蔗糖-緩沖液...
從大鼠肝臟制備微體的方法2021/11/16
材料與儀器雄大鼠蔗糖蔗糖HM玻璃板步驟1.用斷頸法殺死約150g重的雄大鼠，大鼠的數量取決于要制備的粗微體的數量。由于一個150g重的大鼠肝（6g）大約每克肝蛋白含有10mg粗微體，所以大鼠的數量可以...
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