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賴氨酸(lysine,Lys)含量測定試劑盒說明書

閱讀:457      發布時間:2023-03-31
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賴氨酸(lysine,Lys)含量測定試劑盒說明書

                                 微量法100/96

 

    意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

賴氨酸是人體必需氨基酸之一,能促進人體發育、增強免疫功能,并有提高中樞神經組織功能的作用。賴氨酸為堿性必需氨基酸。由于谷物食品中的賴氨酸含量甚低,且在加工過程中易被破壞而缺乏,故稱為第一限制性氨基酸

 

測定原理:

蛋白質中的賴氨酸具有一個游離的ε-NH2,它與茚三酮試劑反應生成藍紫色物質,其顏色的深淺在一定范圍內與賴氨酸的含量成線性關系。亮氨酸與賴氨酸的碳原子數目相同,而且僅有—個游離氨基(ε-NH2),所以通常用亮氨酸配制標準液。

 

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水、水浴鍋。

 

試劑的組成和配制:

提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;

試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入12.5mL試劑三充分溶解混勻;

試劑二:液體12.5mL×1瓶,4℃保存;

試劑三:液體15mL×1瓶,4℃保存;

試劑四:60%乙醇,自備。

 

賴氨酸提?。?/span>

樣本烘干粉碎,稱取約0.01g樣本,加入1mL提取液,充分勻漿。80℃水浴提取20min,冷卻后10000g離心10min,取上清待測。

 

測定步驟:

1、   分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至570nm,蒸餾水調零。

2、   工作液的配制:取10mL試劑一與10mL試劑二混合搖勻,取上清備用。用不完的試劑4℃保存。

3、   在有蓋EP管中加入下列試劑:

試劑名稱(μL

測定管

空白管

樣本

100


提取液


100

工作液

200

200

混勻,80℃水浴30min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻至常溫。

試劑四

300

300

混勻,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,于530nm波長處記錄吸光值A。△A=A測定管-A空白管。

 

空白管只要做一管。

 

賴氨酸含量計算:

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定回歸方程為y = 0.0062x - 0.0212;x為賴氨酸含量(µg/mL),y為吸光值。

1.按照蛋白濃度計算

賴氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515

=185.73×(△A+0.0212) ÷Cpr

2.按照樣本質量計算

賴氨酸含量(µg/g干重)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515

=185.73×(△A+0.0212) ÷W

V1:加入反應體系中樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,1 mLCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本質量,g1.1515,校正系數。

b.96孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定回歸方程為y = 0.0031x - 0.0212;x為賴氨酸含量(µg/mL),y為吸光值。

1.按照蛋白濃度計算

賴氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515

=371.45×(△A+0.0212) ÷Cpr

2.按照樣本質量計算

賴氨酸含量(µg/g干重)= [(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515

=371.45×(△A+0.0212) ÷W

V1:加入反應體系中樣本體積,0.1mLV2:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本質量,g1.1515,校正系數。

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優利科(上海)生命科學有限公司

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