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淀粉分支酶(SBE)試劑盒說明書

閱讀:338      發布時間:2023-04-08
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     淀粉分支酶(Starch branching enzymeSBE試劑盒說明書

                                         微量法100/48

 

   意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義

SBEEC 2.4.1.18)主要存在于植物中,是參與支鏈淀粉合成的關鍵酶,測定SBE活性在淀粉生物合成、優質農作物品種選育和品質遺傳改良研究中具有重要意義。

 

測定原理

直鏈淀粉和碘結合后在660nm有特征光吸收,SBE使直鏈淀粉含量減少,從而降低了淀粉-碘復合物在660nm吸收值,一定時間內吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。

需自備的的儀器和用品

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水

 

試劑的組成和配制

提取液液體100mL×1瓶,4保存;

試劑一:液體10mL×1瓶,4保存;

試劑二:粉劑×1支,4保存;臨用前每支加入1mL蒸餾水,95℃沸水浴充分溶解后備用;用不完的試劑4保存;

試劑三:液體13mL×1瓶,4保存;

試劑四:液體1mL×1瓶,4保存;

 

粗酶液提取

按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。15000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

測定步驟

1、分光光度計預熱30min以上,調節波長到660 nm,蒸餾水調零。

2、加樣表

試劑名稱(μL

對照管

測定管

95℃水浴1min后滅活的粗酶液

65


粗酶液


65

試劑一

85

85

試劑二

10

10

混勻,37準確保溫20 min,置95℃水浴中5 min(蓋緊,防止水分散失),冷卻

試劑三

130

130

試劑四

10

10

混勻,室溫靜置10min,取200uL至微量石英比色皿或96孔板中,660nm讀取各管吸光值。每個測定管需設個一個對照管。

 

注意:

1可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液,然后集中進行5min 95℃沸水浴處理。

2試劑二如有沉淀,務必沸水浴溶解后使用。

 

SBE活力單位的計算

1、按照蛋白濃度計算

單位的定義:以波長660nm的吸光度下降百分率表示,每mg蛋白在反應體系中每降低1%碘藍值為一個酶活性單位。

SBE活性(U/mg prot)=( A對照管-A測定管)/A對照管÷Cpr ×100

2、按照樣本鮮重計算

單位的定義:以波長660nm的吸光度下降百分率表示,每g組織在反應體系中每降低1%碘藍值為一個酶活性單位。

SBE活性(U/g 鮮重)=(A對照管-A測定管)/A對照管÷(W÷V樣總)×100

V樣總:提取液總體積,1mLCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣品質量,g

提供商

優利科(上海)生命科學有限公司

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