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植物淀粉含量試劑盒說明書

閱讀:317      發(fā)布時間:2023-04-08
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植物淀粉含量試劑盒說明書

                                     微量法100/96

 

    意:正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義:

淀粉是植物中糖的主要儲存形式,其含量測定對于評價食品營養(yǎng)價值和調(diào)查植物體內(nèi)糖代謝都有重要意義。

 

測定原理:

利用80%乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開,進(jìn)一步采用酸水解法分解淀粉為葡萄糖,采用蒽酮比色法測定葡萄糖含量,即可計算淀粉含量。

 

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、濃硫酸(不允許快遞)和蒸餾水。

 

試劑的組成和配制:

試劑一:液體100mL×1瓶,4保存;

試劑二:液體105mL×1瓶,4保存;

試劑三:粉劑×1瓶,4保存;

 

淀粉提取:

1、   稱取0.1~0.2g新鮮樣本(建議稱取約0.1g新鮮樣本)于研缽中研碎,加入1mL試劑一,充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP管中,80℃水浴提取30min3000g25℃離心5min,棄上清,留沉淀。

2、   沉淀中加入0.5mL蒸餾水,放入95℃水浴中糊化15min(蓋緊,以防止水分散失)

3、   冷卻后,加入0.35mL試劑二,25℃常溫提取15min,振蕩3-5次。

4、   加入0.85mL蒸餾水,混勻,3000g25℃離心10min,取上清液待測。

注意:如樣本為淀粉含量較高的干樣,為保證充分提取,可適當(dāng)減小取樣量,如稱取0.01g~0.02g干樣,加入1mL試劑一,其余提取步驟同上。

 

測定步驟:

1、   分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至620nm,蒸餾水調(diào)零。

2、   調(diào)節(jié)水浴鍋至95度。

3工作液的配制:臨用前在試劑三中加入3.75mL蒸餾水后,緩慢加入21.25mL濃硫酸,不斷攪拌,充分溶解,待用;用不完的試劑4保存一周;

4樣本測定:取50μL樣本和250μL工作液至EP管中,95度水浴10 min(蓋緊,防止水分散失),自然冷卻至室溫,取200uL至微量石英比色皿或96孔板中,在620 nm 波長下記錄測定吸光度值A

  

淀粉含量計算:

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 5.872x - 0.0295x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mLy吸光

1、按照蛋白濃度計算

淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷5.872 ÷(V1×Cpr)=0.17×(A+0.0295) ÷Cpr

2、按樣本鮮重計算

淀粉含量(mg/g 鮮重)= [(A+0.0295)×V1] ÷5.872÷(W×V1÷V2) =0.289×(A+0.0295) ÷W

V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.05mLV2:加入提取液體積,1.7 mLCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g

 

b.96孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 2.936x - 0.0295x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mLy吸光

1、按照蛋白濃度計算

淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷2.936 ÷(V1×Cpr)=0.34×(A+0.0295) ÷Cpr

2、按樣本鮮重計算

淀粉含量(mg/g 鮮重)=[(A+0.0295)×V1]÷2.936÷(W×V1÷V2) =0.578×(A+0.0295) ÷W

V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.05mLV2:加入提取液體積,1.7 mLCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g

 

注意由于工作液具有強(qiáng)腐蝕性,請謹(jǐn)慎操作。

      若吸光值大于1,請將樣本用提取液稀釋后再測定,計算公式中乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

提取液的配置0.35mL試劑二+1.35mL水。用多少按照此比例配多少。

Z低檢測限為10μg/g鮮重或100ng/mgprot

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