α-淀粉酶（α-amylase，α-AL）試劑盒說明書
微量法100管/48樣
注 意：正式測定前請取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
淀粉水解酶，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-AL (EC 3.2.1.1)隨機催化淀粉中α-1,4-糖苷鍵水解，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖，同時使淀粉的粘度降低，因此又稱為液化酶。
測定原理：
淀粉水解酶催化淀粉水解生成還原糖，還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質，在540 nm有吸收峰；通過測定540 nm吸光度增加速率，計算淀粉酶活性。α-AL耐熱，但是β-淀粉酶可在70℃鈍化15min。因此粗酶液經過70℃鈍化15min，就只有α-AL能夠催化淀粉水解。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體15mL×1瓶，室溫保存。若有黃色晶體析出，可90℃加熱溶解后再用。
試劑二：液體7.5mL×1瓶，4℃保存。若有沉淀析出，可70℃加熱溶解后使用。
粗酶液提取：
組織：稱取0.1~0.2g樣本（建議稱取約0.1g樣本），加1 mL蒸餾水勻漿；將勻漿倒入離心管中，在室溫下放置提取15min，每隔5min振蕩1次，使其充分提取；3000g，25℃離心10min，吸取上清液并且加蒸餾水定容至10 mL，搖勻，即為淀粉酶原液。
血清（漿）：直接檢測。
操作步驟和加樣表（在EP管中依次加入下列試劑）：
1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長到540 nm，蒸餾水調零。
2、 試劑一和試劑二40℃預熱10min。
3、測定步驟：
試劑（μL） | 對照管 | 測定管 |
α?淀粉酶原液 | 75 | 75 |
70℃水浴15min左右，流水冷卻。
蒸餾水 | 75 | |
試劑二 | 75 |
在40℃恒溫水浴中準確保溫5min
試劑一 | 150 | 150 |
混勻，95度水浴5min，冷卻，取200μL 至微量石英比色皿或96孔板中，540nm處讀取吸光值，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需設一個對照管。
α-淀粉酶活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、標準條件下測定回歸曲線為y=3.7215x -0.1778； x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。
2、α?淀粉酶活性
（1）按照樣本質量計算
單位定義：每g組織每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。
α?淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=[(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=1.075×(ΔA＋0.1778)÷W
（2）按照蛋白質含量計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。
α?淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反總]÷（V樣×Cpr）÷T=0.1075×(ΔA＋0.1778) ÷Cpr
（3）血清（漿）樣本中α?淀粉酶活性計算
單位定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。
α?淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反總]÷V樣÷T=0.1075×(ΔA＋0.1778)
反總：反應體系總體積，0.15mL；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.075 mL；V樣總：提取液總體積，10 mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，5min。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、標準條件下測定回歸曲線為y=2.481x -0.1778； x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。
2、α?淀粉酶活性
（1）按照樣本質量計算
單位定義：每g組織每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。
α?淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=[(ΔA＋0.1778)÷2.481×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=1.612×(ΔA＋0.1778)÷W
（2）按照蛋白質含量計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。
α?淀粉酶活性（mg/min/mg prot）=[(ΔA＋0.1778)÷2.481×V反總]÷（V樣×Cpr）÷T =0.1612×(ΔA＋0.1778) ÷Cpr
（3）血清（漿）樣本中α?淀粉酶活性計算
單位定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。
α?淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(ΔA＋0.1778)÷2.481×V反總]÷V樣÷T=0.1612×(ΔA＋0.1778)
V反總：反應體系總體積，0.15mL；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.075 mL；V樣總：提取液總體積，10 mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，5min。
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