植物硝態氮試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
硝態氮是植物最主要的氮源。植物體內硝態氮含量反映了土壤中硝態氮的供應情況,可作為土壤氮肥的指標。測定植物體內的硝態氮含量,不僅能夠反映出植物的氮素營養情況,而且對鑒定蔬菜和以植物為原料的加工制品的品質也有重要的意義。
測定原理:
在濃酸條件下,NO3-與水楊酸反應,生成硝基水楊酸,硝基水楊酸在堿性條件下(PH>12)呈黃色,在一定范圍內,其顏色深淺與含量成正比,可比色測定計算得硝態氮含量。
自備實驗用品及儀器:
蒸餾水、天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制:
試劑一:粉劑×2支,4℃避光保存。臨用前根據用量每瓶加1.2mL濃硫酸充分溶解。
試劑二:液體60mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1支,4℃保存。
樣本處理:
按照質量(g):蒸餾水體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL蒸餾水)加入蒸餾水,室溫勻漿后置于90℃恒溫水浴鍋中浸提30min,期間不斷晃動或者置于90℃恒溫搖床中振蕩提取30min,待冷卻后于25℃,12000g離心15min,取上清待測。(深色植物勻漿后加入約3mg試劑三后再提取)
測定操作表:
分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長至410nm,蒸餾水調零。
1、 在EP管中如下表加樣
空白管 | 測定管 | |
樣本(μL) | 10 | |
蒸餾水(μL) | 10 | |
試劑一(μL) | 20 | 20 |
充分混勻,25℃靜置30min | ||
試劑二(μL) | 475 | 475 |
混勻,渦旋振蕩,使出現的沉淀充分溶解,轉移200uL至微量石英比色皿/96孔板中測定410nm處吸光值A,△A=A測定管-A空白管 |
注意:空白管只需測定一次。
計算公式:
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線:y=0.0156x+0.0073,R2=0.9997
NO3—— N含量(mg/kg鮮重)=(△A-0.0073)÷ 0.0156÷(W÷V樣總)
=64.1×(△A-0.0073)÷W
V樣總:加入提取液體積,1mL,W:樣本質量,g
a. 用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線:y=0.0078x+0.0073,R2=0.9997
NO3—— N(mg/kg鮮重)=(△A-0.0073)÷ 0.0078÷(W÷V樣總)
=128.2×(△A-0.0073)÷W
V樣總:加入提取液體積,1mL,W:樣本質量,g
注意事項:
1. 試劑一配制好后盡快使用,4℃可保存一周。
2. 試劑一和試劑二均具有強腐蝕性,操作時需做好防護措施。
3. Z低檢出限為2μg/g。
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