血清低密度脂蛋白(Low density lipoprotein cholesterol , LDL-C)試劑盒說明書
微量法100管/96樣
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
低密度脂蛋白為血清蛋白之一,主要由肝臟合成,與冠心病的發生和動脈粥樣硬化損傷呈正相關,是脂類疾病分類和風險預測的一個重要指標。
測定原理:
用沉淀劑分離血清中的低密度脂蛋白膽固醇,利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇和游離脂肪酸,從而把膽固醇酯轉化為FC;進一步利用膽固醇氧化酶催化FC氧化,生成△4-膽甾烯酮和H2O2;再利用過氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚,生成紅色醌類化合物;在500nm有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品:
離心機,恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體20mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體15mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存。臨用前加5mL試劑四充分溶解。
試劑四:液體10mL×1瓶,4℃保存。
標準品:液體1mL×1支,4℃保存。
樣品處理:
取血后3小時內分離血清,將血清樣品與試劑一按照2:1的比例充分混勻,25℃靜置15min,2000g離心15min,上清置于冰上待測。
測定操作表:
空白管 | 標準管 | 測定管 | |
蒸餾水(μL) | 4 | ||
標準品(μL) | 4 | ||
樣本(μL) | 4 | ||
試劑二(μL) | 150 | 150 | 150 |
試劑三(μL) | 50 | 50 | 50 |
混勻,37℃靜置30min,于1mL玻璃比色皿,空白管調零,測定500nm處吸光值A。分別記為A標準管和A測定管 |
計算公式:
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
LDL-C含量(mmol/L)= A測定管÷A標準管×C標準管
=5×A測定管÷A標準管
C標準管:5mmol/L
b.用96孔板測定的計算公式如下
LDL-C含量(mmol/L)= A測定管÷A標準管×C標準管
=5×A測定管÷A標準管
C標準管:5mmol/L
注意事項:
1. 樣本切勿反復凍融,最好在取血后12小時內完成測定。
2. 配置好的試劑三4℃保存可半個月。
3. 線性范圍為0.17mmol/L- 4.2mmol/L。
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