游離脂肪酸（FFA）含量試劑盒（測植物組織）
微量法100T/48S
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
FFA既是脂肪水解的產物，又是脂肪合成的底物。FFA的濃度與脂類代謝、糖代謝、內分泌功能有關，也可反映食物貯藏中的品質變化。
測定原理：
在弱酸性條件下，FFA與銅鹽反應生成銅皂，在715nm處有特征吸收峰，在一定范圍內游離脂肪酸含量與顯色程度呈線性關系。
自備儀器和用品：
研缽、臺式離心機、震蕩儀、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板。
試劑組成和配制：
試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體20mL×1瓶，4℃保存。
樣品中FFA提取：
組織用蒸餾水沖洗干凈后，用吸水紙吸取表面水分，搗碎后按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）加入試劑一，震蕩提取3h，8000g，4℃離心10min，取上清液待測。
測定操作：
1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min，調節波長到715 nm。
2. 對照管：取上清液0.4mL，加0.2mL試劑二，充分震蕩5min，室溫靜置5min，取上層200μL于微量石英比色皿/96孔板，調零。
3. 測定管：取上清液0.4mL，加0.2mL試劑三，充分震蕩5min，室溫靜置5min，取上層200μL于微量石英比色皿/96孔板，測定吸光值，記為A。
FFA含量計算：
a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y=0.0075 x+ 0.0055，R2=0.994
（1）按樣本蛋白濃度計算
FFA（nmol/mg prot）= (A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V1×Cpr)=133×(A-0.0055)÷Cpr
（2）按樣本質量計算
FFA（nmol/g 鮮重）= (A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V1÷V2×W)=133×(A-0.0055)÷W
V1：加入樣本體積，0.4mL；V2：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量，g。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y=0.0038 x+ 0.0055，R2=0.994
（1）按樣本蛋白濃度計算
FFA（nmol/mg prot）= (A-0.0055)÷0.0038×V1÷(V1×Cpr)=266×(A-0.0055)÷Cpr
（2）按樣本質量計算
FFA（nmol/g 鮮重）= (A-0.0055)÷0.0038×V1÷(V1÷V2×W)=266×(A-0.0055)÷W
V1：加入樣本體積，0.4mL；V2：提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量，g。
注意事項：
1. 蛋白含量不可直接用提取的上清液直接測定，可用蒸餾水或緩沖液或生理鹽水選用本公司的BCA法蛋白含量測定試劑盒。
2. Z低檢出限為2 nmol/mL。
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