蔗糖（sucrose）含量試劑盒說明書
微量法100管/96樣
注 意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
蔗糖是植物光合作用的主要產(chǎn)物，也是糖分運輸和儲藏的主要形式。因此，測定蔗糖含量對于植物糖代謝具有重要意義。此外，蔗糖含量是飲料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等產(chǎn)品質(zhì)量控制的重要指標之一。
測定原理：
先用堿與樣品共熱，破壞其中的還原糖。然后在酸性條件下將蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，果糖進一步與間苯二酚反應，生成有色物質(zhì)，在480nm下有特征吸收峰。
所需的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：液體 100ml×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體10mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：液體2ml×1瓶，4℃保存；
試劑三：液體 20ml×1瓶，4℃保存；
試劑四：液體 6ml×1瓶，4℃避光保存；
試劑五：粉劑0.5g×1瓶，常溫保存。
蔗糖提?。?/span>
稱取0.1~0.2g樣本，常溫研碎，加入0.5mL提取液，適當研磨后快速轉(zhuǎn)移到離心管中，置于80℃水浴鍋中10min，振蕩3~5次，冷卻后，4000g，常溫離心10min，取上清，加入2mg試劑五，80℃脫色30min，再加入0.5mL提取液，冷卻后，4000g，常溫離心10min，取上清液測定。
測定步驟：
1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至480nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 樣本測定，（在EP管中依次加入下列試劑）：
試劑（μL） | 空白管 | 標準管 | 測定管 |
樣本 | 25 | ||
試劑一 | 25 | ||
蒸餾水 | 25 | ||
試劑二 | 15 | 15 | 15 |
混勻，沸水浴煮沸5min左右（蓋緊，防止水分散失）
試劑三 | 175 | 175 | 175 |
試劑四 | 50 | 50 | 50 |
混勻，沸水浴30min，冷卻后取200μL至微量石英比色皿或96孔板中測定480nm處光吸收值，空白管、標準管和測定管分別記為A1、A2和A3?？瞻坠芎蜆藴使苤灰鲆还?。
蔗糖含量計算：
1、按照蛋白質(zhì)含量計算
蔗糖含量(mg/mg prot)=(C標準管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷（V1×Cpr）= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr
此法需要自行測定蛋白濃度。
2、按照樣品質(zhì)量計算
蔗糖含量(mg/g鮮重)=(C標準管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=(A3-A1)÷(A2-A1)÷W。
C標準管：標準管濃度，1mg/mL；V1：加入樣本體積，0.025mL；V2：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。
注意：Z低檢測限為100ng/g鮮重或1ng/mg prot
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