人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞
（MM.1R）
細(xì)胞描述
該細(xì)胞系的母細(xì)胞株MM.1是從一位對類固醇療法產(chǎn)生抗藥性的多發(fā)性骨髓瘤患者的外周血中建立的。MM.1R對地塞米松耐藥。近緣細(xì)胞系MM.1S也是從MM.1中分離出來的，但對地塞米松敏感。該細(xì)胞復(fù)蘇后需要兩周左右才能恢復(fù)正常生長。
細(xì)胞特性
1） 來源：人、女性、外周血
2） 形態(tài)：成淋巴瘤細(xì)胞，懸浮和輕微的貼壁同時存在
3） 含量：>1x106 細(xì)胞數(shù)
4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5） 用途：僅供科研使用。
運(yùn)輸和保存：干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請?jiān)?/span>4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）半貼細(xì)胞和貼壁不牢（懸?。┘?xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的情況，若細(xì)胞密度在60%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮細(xì)胞離心后用完培重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細(xì)胞生長70%-90%對細(xì)胞進(jìn)行傳代，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細(xì)胞離心后回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完培來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備1640培養(yǎng)基,優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %，P/S青霉素-鏈霉素 1%
2） 注意事項(xiàng)：
a.該細(xì)胞同時存在懸浮生長和輕微的貼壁狀態(tài)。
b.該細(xì)胞復(fù)蘇后需培養(yǎng)2周左右時間，才能恢復(fù)正常生長狀態(tài)。
c.細(xì)胞密度不可過高，在細(xì)胞匯合前進(jìn)行傳代，過度融合生長細(xì)胞容易產(chǎn)生死細(xì)胞團(tuán)。
3） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
4） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完培的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完培重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完培的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞，傳代可以參考以下方法：
該細(xì)胞是一種混合生長的細(xì)胞；細(xì)胞既可以以輕度附著的單層形式生長，也可以以懸浮液形式生長?？梢酝ㄟ^添加新鮮培養(yǎng)基來維持培養(yǎng)。或者，可以通過將貼壁細(xì)胞用細(xì)胞刮鏟刮入含有漂浮細(xì)胞的培養(yǎng)基中，通過離心收集細(xì)胞，將細(xì)胞沉淀重懸于新鮮培養(yǎng)基中并分配到新的培養(yǎng)瓶中來對細(xì)胞進(jìn)行傳代。建議收貨后的第一次傳代密度為1:2進(jìn)行。后續(xù)的傳代可根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:4的比例進(jìn)行。
3） 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例；
1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細(xì)胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
注意事項(xiàng)：
1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。
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