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生物堿含量試劑盒說明書

閱讀:744      發布時間:2023-09-01
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生物堿含量試劑盒說明書

微量法100 /96

 

   正式測定前取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:

生物堿存在于自然界主要為植物,但有的也存在于動物中的一類含氮的堿性有機化合物大多數有復雜的環狀結構,氮素多包含在環內,有顯著的生物活性,是中草藥中重要的有效成分之一。

 

測定原理:

生物堿與溴甲酚綠指示劑反應,生成綠色化合物,在 416nm 處有最大吸收峰。

 

需自備的儀器和用品:

酶標儀、水浴鍋、超聲波清洗器、可調式移液器、96 孔板、研缽、80%乙醇、氯仿和蒸餾水。

 

試劑的組成和配制:

試劑一:液體 12mL× 1 瓶,4℃保存; 試劑二:液體 30mL × 1 瓶,4℃保存;

試劑三:液體 15mL × 1 瓶,4℃避光保存;

 

生物堿的提取:

樣本烘干粉碎,過 80 目篩。稱取約 0.1g 樣本,加入 0.1mL 試劑一,再加入 0.9mL80%乙醇, 充分混勻后轉移到EP 管中,超聲波提取 60min8000 g25℃離心 10 min,取上清液待測。另取空 EP 管,加入 0.1mL 試劑一和 0.9mL80%乙醇,混勻后作為空白液。

 

測定步驟:

1、酶標儀預熱 30min 以上,調節波長至 416nm 處。

2、操作表:在EP 管中加入如下試劑

試劑名稱(µL

空白管

測定管

樣本


50

空白液

50


試劑二

250

250

試劑三

100

100

混勻,室溫靜置 5min

氯仿

500

500

劇烈振蕩混勻,室溫靜置 40min,吸取下層氯仿層 200µL 96 孔板,416nm 處讀取吸光值

AΔA=A 測定-A 空白,空白管只要做一管。

 

生物堿含量計算:

標準條件下測定的回歸方程為 y = 1.915x - 0.0005R2 = 0.9942x 為標準品濃度mg/mL),

y ΔA

生物堿含量(mg/g 干重)=(ΔA+0.0005)÷1.915×V 樣總÷W= 0.522×(ΔA+0.0005) ÷W

V 樣總:加入提取液體積,1mLW:樣本鮮重,g


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優利科(上海)生命科學有限公司

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