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RAW 264.7 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞說明書

閱讀:838      發布時間:2023-09-04
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  小鼠單核巨噬細胞白血病細胞

(RAW264.7)

細胞描述

此細胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒,XC斑點形成試驗陰性。可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖。可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。LPS或PPD處理2天可誘導分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用。

細胞特性

1)  來源:鼠科白血病病毒誘導的腫瘤;單核細胞;巨噬細胞

2)  形態:不規則圓形,紡錘狀,貼壁細胞,少量懸浮。

3)  含量:>1x106  細胞數

4)  規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。

 

運輸和保存:干冰運輸及復蘇好存活細胞:(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理:

1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。

2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據。

3)半貼細胞或貼壁不牢(懸浮)細胞:T25瓶置于37℃培養箱中約2-3h,顯微鏡下觀察細胞的情況,若細胞密度在60%以下,客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用完重懸后打回到原培養瓶中繼續培養,若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代,傳代時需要收集培養基中懸浮的細胞離心后回收。

4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完來培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。 

 

細胞培養步驟

一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備DMEM(包含2mM L-谷氨酰胺,0.11g / L丙酮酸鈉)培養基;優質胎牛血清10 %;P/S青霉素-鏈霉素 1%。

2) 注意事項:

(a)在細胞生長的初始階段,細胞以貼壁的形式生長并呈現出長方體的形態和有“偽足"延伸。隨著培養時間的增加,細胞呈現圓形并以疊加的形式生長。細胞密度達到一定的程度,會有細胞以懸浮的方式散落到到培養基中,鏡下觀察會發現懸浮和貼壁的細胞會同時出現。(b)該細胞傳代時不需要用胰酶消化。傳代時,用無菌細胞刮刮拭培養表面將細胞刮落,收集離心后重懸接種到新的培養瓶中。(c)該細胞形態上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當細胞密度較大時,細胞會輕微脫落變圓或者許多細胞堆積在一起,有些細胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細胞是存活的,在傳代時應收集起來,離心后細胞沉淀可以繼續培養。(d)血清質量差異可能引起細胞貼壁能力變化,應選用高質量的胎牛血清。

3) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

4) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。

 

二. 細胞處理:

1)凍存細胞的復蘇:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完培重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達70%-90%,即可進行傳代培養。

該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞,傳代可以參考以下方法:

該細胞用細胞刮鏟替代胰酶來對細胞進行處理。用無菌細胞刮鏟刮拭細胞附著培養表面將細胞刮落,收集細胞后離心去上清,重懸后接種到新的裝有新鮮培養液的培養瓶內。收貨后第一次傳代1:2進行,后續可以根據實際的情況以1:2~1:4的比例進行傳代。

3) 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。下面T25瓶為例;

1. 1,細胞用細胞刮鏟替代胰酶來對細胞進行處理。用無菌細胞刮鏟刮拭細胞附著培養表面將細胞刮落,收集細胞。

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

 

注意事項:

 1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意:凍存管浸沒在液氮中會泄漏,并會慢慢充滿液氮。解凍時,液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。


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優利科(上海)生命科學有限公司

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