精品亚洲a∨无码专区毛片-精品亚洲aⅴ无码午夜在线-精品亚洲aⅴ无码午夜在线观看-精品亚洲aⅴ无码一区二区三区-精品亚洲aⅴ无码专区毛片-精品亚洲aⅴ在线

您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)

| 注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏該商鋪

15021281375

Download

首頁   >>   資料下載   >>   3-磷酸甘油酸激酶(3-Phosphoglycerate kinase,PGK) 試劑盒說明書

優(yōu)利科(上海)生命科學有...

立即詢價

您提交后,專屬客服將第一時間為您服務(wù)

3-磷酸甘油酸激酶(3-Phosphoglycerate kinase,PGK) 試劑盒說明書

閱讀:309      發(fā)布時間:2023-09-19
分享:

3-磷酸甘油酸激酶(3-Phosphoglycerate kinasePGK

試劑盒說明書

                                                    微量法100T/96S

 

   正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的關(guān)鍵酶,廣泛存在于動植物和微生物體內(nèi),催化13-二磷酸甘油酸轉(zhuǎn)變?yōu)?/span>3-磷酸甘油酸,產(chǎn)生1分子ATP,具有影響DNA復(fù)制和修補及刺激病毒RNA合成等生物學功能,廣泛應(yīng)用于藥物靶標設(shè)計。

 

測定原理:

3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP產(chǎn)生1,3-二磷酸甘油酸和ADP1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脫氫酶和NADH作用下產(chǎn)生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸,340nm處的吸光度變化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。

 

自備實驗用品及儀器:

天平、低溫離心機、研缽、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板

 

試劑組成和配制:

提取液:液體100mL×2瓶,4℃保存。 

試劑一:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。

試劑二:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。臨用前加2mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

試劑三:粉劑×1支,-20℃避光保存。臨用前加1mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

試劑四:粉劑×1支,-20℃避光保存。臨用前加1 mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

試劑五:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。臨用前加4 mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

 

酶液提取:

PGK酶提取:建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4500g離心5min,取上清測定。

②胞漿和葉綠體PGK酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)1510的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液),冰浴勻漿后于4500g離心5min,棄沉淀,取上清在48000g離心10min,取上清用于測定胞漿PGK酶活性,取沉淀加1mL提取液,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4500g離心5min,取上清測定葉綠體中PGK酶活性。

建議測定總PGK酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的PGK,則按照步驟②提取粗酶液。

 

測定操作:

1.        分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。

2.        微量石英比色皿/96孔板,依次加入100μL試劑一,20μL試劑二,10μL試劑三,10μL試劑四,40μL試劑五,20μL粗酶液,充分混勻,記錄340nm10s的吸光值A1310s的吸光值A2,△A=A1-A2

計算公式:

a.        用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1)按照樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義:每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmolNADH定義為一個酶活力單位。

PGKnmol/min /mg prot)=ΔA÷ε×d×V反總÷(V×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

2)按照樣本質(zhì)量計算

酶活單位定義:每組織每分鐘消耗1 nmolNADH定義為一個酶活力單位。

PGKnmol/min /g 鮮重)=ΔA÷ε×d×V反總÷(W ×V÷V樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W

V反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mLεNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cmd:比色皿光徑,1cmV樣:加入樣本體積,0.02mLV樣總:加入提取液體積,1mLT:反應(yīng)時間,5 minCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g

 

b.       96孔板測定的計算公式如下

1)按照樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義:每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmolNADH定義為一個酶活力單位。

PGKnmol/min /mg prot)=ΔA÷ε×d×V反總÷(V×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr

2)按照樣本質(zhì)量計算

酶活單位定義:每組織每分鐘消耗1 nmolNADH定義為一個酶活力單位。

PGKnmol/min /g 鮮重)=ΔA÷ε×d×V反總÷(W ×V÷V樣總) ÷T=643.08×ΔA÷W

V反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mLεNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cmd:比色皿光徑,0.5cmV樣:加入樣本體積,0.02mLV樣總:加入提取液體積,1mLT:反應(yīng)時間,5 minCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g


提供商

優(yōu)利科(上海)生命科學有限公司

下載次數(shù)

26次

資料大小

33KB

資料類型

WORD 文檔

資料圖片

點擊查看

瀏覽次數(shù)

309次

產(chǎn)品展示

會員登錄

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
在線留言
主站蜘蛛池模板: 日本乱人伦| 亚洲大片在线免费看| 亚洲色大成网站www不卡大全| 精品无人码麻豆乱码1区2区| 区一区区三区产品无卡高清在线| 69无人区码二码三码七码| 久久久久99精品成人网站| 国产区图片区小说区亚洲区| 欧美女视频网站大全在线观看| 精品人妻无码一区二区三区在线 | 久久最新网址| 精品国产欧美另类一区| 精品香蕉一区二| 亚洲天堂v| 久久不卡精品| 国产视频无码在线观看| 亚洲av片天天在线观看| 六月婷婷综合激情| 国产精品又黄又爽无遮挡嘿嘿国产在线麻豆波多野结衣 | 国产av无码专区| 日本一本二本三本区视频电视剧在线观看 | 精品一区二区三区自拍| 亚洲性夜色噜噜噜网站2258KK| 蜜桃视频极品免费观看| 国产毛片特级av片| 四虎影视884a精品国产古代| 日本一区二区在线看| 国产成人久久| 日本欧美中文幕| 免费的成人性视频网站| 成a人影院在| 麻豆一区二区免费播放网站| 97人妻熟女中文免费视频| 99色婷婷| 久久精品99久久香蕉国产| 日日夜夜久久嫩草| 日本综合a一区二区视频| 国产亚洲精品AV片在线观看播放| 性欧美欧美巨大69| 国产一区在线播放| 国产a一区二区三区香蕉小说|